[发明专利]枸杞粗多糖的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种粗多糖的纯化方法，属于食品添加剂及其制备方法领域。

背景技术

枸杞子是枸杞的干燥成熟果实，具有多种生理功能。枸杞多糖是枸杞的重要活性成分，具有诱导细胞凋亡、抗氧化、提高免疫、抗衰老等多种生理活性。现有报道多集中在LBP的提取工艺研究上，但是未纯化的枸杞粗多糖的效用并不明显，无法直接使用。

发明内容

本发明旨在提供一种能获得高纯度枸杞多糖的枸杞粗多糖的纯化方法。

本发明所述的枸杞粗多糖的纯化方法，包括：将枸杞粗多糖依次进行有机溶剂脱色、醇沉、过cellulose DE-52色谱柱和过SephedexG－75葡聚糖凝胶色谱柱即可。

优选地，有机溶剂脱色时选用的有机溶剂为氯仿和正丁醇，其中枸杞粗多糖溶液(0．2％，g／v)：氯仿：正丁醇=25：5：1(v／v／v)。

更优选地，有机溶剂脱色包括：将枸杞粗多糖溶于蒸馏水中，制成0．2％（g／v）的溶液，然后加入氯仿和正丁醇，摇床20min，离心3400转／分钟、15min后取上层水溶液。

或者优选地，醇沉的次数为5次。

通过琼脂糖凝胶电泳及HPLc纯度检验表明，本发明获得的枸杞多糖均为均一的多糖组分，通过HPLc出峰时间计算出其                                                为866130D和1412100D。

具体实施方式

实施例一：

1、将0．19粗多糖溶于50mL蒸馏水，加入10mL氯仿和2mL正丁醇，摇床20min，离心3400转／面n、15min，取上层水溶液，观察溶液颜色变化并用苯酚硫酸法检测糖损失量，结果为19.5%。

2、向上述溶液中缓慢加入95％的乙醇终浓度至80％，静置过夜，离心3400转／分钟，15min后收集沉淀，重溶于50mL蒸馏水中，重复上述步骤四次后，收集沉淀。将沉淀进行HPLC，结果，主峰(出峰时间6．469min)所占比例为93．15％。

3、将沉淀溶于蒸馏水中，上样于cellulose DE-52色谱柱((12mm(200mm)，洗脱液依次为蒸馏水、0．05moL／L NaCl、0．10moL／L NaCl、0．15moL／L NaCl、0．20moL／L NaCl、0．25moL／L NaCl、O．30moL／L NaCl，流速为18mL／h，自动部分收集器收集洗脱液，每管1．5mL，苯酚硫酸法检测每管糖含量，绘制洗脱曲线，收集每个洗脱组分的主峰部分，标号为LBP-l、LBP-2、LBP-3、LBP-4、LBP-5、LBP-6。

4、取LBP一4、LBP一5溶于蒸馏水，上样于Sephadex G一75凝胶色谱柱((25mm(400mm)，脱气蒸馏水洗脱，流速为28mL／h，自动部分收集器收集洗脱液，每管4．5mL，苯酚硫酸法检测每管糖含量，绘制洗脱曲线，收集主峰部分，得LBP一4a和LBP一5a。

6、分别取LBP一4a和LBP一5a溶于蒸馏水，琼脂糖凝胶(5．0cm×8．0cm，0．6％)电泳分离。电泳条件为TBE缓冲液，120V，20分钟，加样量为5微升。0.1％的甲苯胺蓝溶液染色10min，脱色液(醋酸：乙醇：水体积比0．1：5：5)清洗，蒸馏水洗至背景无色。结果，LBP一4a、LBP一5a经琼脂糖凝胶电泳，甲苯胺蓝染色，胶带上出现均一斑点，表明LBP一4a和LBP一5a都是均一的多糖组分。

7、称取分子质量为67万、41万、15万、8万、5万的右旋糖酐各5mg，分别溶于0．5mL三蒸水中，HPLC检测。对出峰时间和分子质量进行回归分析，得标准曲线为y=13.125x⁴—491.54x³+6910.8x²—43243x+101651，R=O.9992。

另称取LBP-4a和LBP-5a各5mg，分别溶于0.5mL三蒸水中，HPLC法进行纯度鉴定，并通过上述标准曲线计算出分子质量。结果得出分别为866130D和1412100D。