[发明专利]双功能融合蛋白及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及双功能融合蛋白及其制备方法和用途。具体而言，本发明涉及包含CTLA4分子胞外区、Fc片段以及具有中和TNFα活性的功能片段的双功能融合蛋白、编码该双功能融合蛋白的基因、含有该基因的载体、含有该载体的宿主细胞以及含有该双功能融合蛋白的药物组合物，所述具有中和TNFα活性的功能片段是TNFR2分子胞外区或抗TNFα单链抗体，其中CTLA4分子胞外区位于双功能蛋白的N端，TNFR2分子胞外区或抗TNFαscFv位于双功能蛋白的中间或C端。本发明的双功能融合蛋白能够同时阻断B7/CD28和TNFα/TNFR信号通路，从而抑制炎症反应。与使用单功能蛋白的情况相比，可降低生产成本，并减少临床给药体积和频率，提高受试者顺从性。

技术领域

本发明涉及双功能融合蛋白及其制备方法和用途，具体而言，本发明涉及包含CTLA4分子胞外区、Fc片段以及有中和TNFα活性的功能片段的双功能融合蛋白、编码该双功能融合蛋白的基因、含有该基因的载体、含有该载体的宿主细胞以及含有该双功能融合蛋白的药物组合物。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis，RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性、进行性、系统性自身免疫性疾病，在全球人群中的发病率为0.5％-1％。其早期的症状表现为关节的肿胀、疼痛、活动困难等。随着病情的发展，关节会严重畸形甚至致残，并且有可能累及其它的组织和器官，引起肺间质病变、胸膜炎、心包炎、类风湿血管炎等疾病的发生。因此，及时有效地治疗对于阻止病程的发展、缓解症状、改善患者的生活质量意义重大。

传统的RA治疗主要采用非甾体类抗炎药物、糖皮质激素和缓解病情的药物。随着RA发病机理研究的深入，越来越多的生物制剂被用于RA的治疗并展示了较传统RA治疗药物起效更加迅速、治疗周期更短、副作用更小的优点。目前已经上市的治疗RA的生物制剂作用于多个不同的靶点，如抑制TNFα活性的TNFα的拮抗剂、针对B细胞的单克隆抗体利妥昔单抗(Rituximab)、抑制T细胞活性的阿巴他赛(Abatacept)、抑制IL-6信号通路的单克隆抗体妥珠单抗(Tocilizumab)、中和IL-1活性的阿那白滞素(Anakinra)等(Vierboom M,BreedveldE,Hart BA.Expert opinion on drug discovery.2012,7(4):315-325)。其中，TNFα的拮抗剂是治疗RA的一线药物，所占市场份额也最大。TNFα是一种细胞炎症因子，通过与其受体TNFR1和TNFR2结合诱导其它炎症因子的分泌。TNFα的拮抗剂能够阻止这种结合，降低TNFα信号通路的活性，达到抑制炎症反应的目的。目前已上市的TNFα的拮抗剂主要有可溶性的TNFα受体和TNFα单克隆抗体两类。可溶性的TNFα受体是将TNFR2的胞外区与IgG的恒定区进行融合，如辉瑞(Pfizer)公司于1998年上市的依那西普(Etanercept)。TNFα单克隆抗体类是特异识别TNFα的基因工程抗体，能够中和TNFα，目前已上市的有J&J的英利昔单抗(Infliximab)和戈利木单抗(Golimumab)，UCB公司的赛妥珠单抗(Certolizumab)以及雅培(Abbott)公司的阿达木单抗(Adalimumab)(Lin J,Ziring D,Desai S,et al.ClinicalImmunology,2008,126:13-30)。临床应用显示，TNFα的拮抗剂可以有效地减轻RA炎症、缓解关节的放射学进展，患者ACR20指数的改善率达50％-70％。但是，同时也发现有20-30％的患者对TNFα的拮抗剂的应答不理想，或者在接受长期的TNFα的拮抗剂治疗后，效果逐渐下降(Gibbons LJ,Hyrich KL.Biodrugs,2009,23(2):111-124)。对于这部分患者就必须使用其它作用机制的抗RA药物进行治疗。