[发明专利]一种海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法

权利要求书

1.一种海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法，其特征在于：利用无N₂O还原酶活性的反硝化细菌将待测海水中硝酸盐进行离线处理后转化为氧化亚氮气体，使用痕量气体预浓缩装置(Precon)-气相色谱(GC)-同位素比质谱仪(MS)联机进行氮氧稳定同位素的在线连续测定。

2.按权利要求1所述的海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法，其特征在于：

所述离线处理是将无N₂O还原酶活性的反硝化细菌接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，在恒温震荡富集培养5-10天后，将菌液离心，取底层沉淀细菌加入牛肉膏蛋白胨培养液中，使得菌液浓度浓缩至富集培养后菌液浓度的10-20倍，震荡混匀后加入抑泡剂(Sigma)，待用。

3.按权利要求1所述的海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法，其特征在于：

将上述离线处理后所得浓缩菌液置于倒置的样品瓶中，并通氦气吹扫菌液及样品瓶顶空气3h，而后注入待测水样使样品中硝酸盐氮含量为0.2-20μg，倒置放于恒温摇床20-30℃震荡过夜培养，培养后离心并使用Precon-GC-MS联机测定，得出N₂O氮氧稳定同位素值。

4.按权利要求1所述的海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法，其特征在于：

将上述测定的氮氧同位素测试结果进行校正，使用多点校正法，取国际原子能标准品USGS32、USGS34以及USGS32和USGS34混合配制后的标准品共五个标准品，标准品与样品一起进行同样的离线处理并同一批次测定，使用五个标准品的测量值和真值建立标准曲线，对样品测定结果进行校正。

5.按权利要求1所述的海水硝酸盐氮氧稳定同位素测定的方法，其特征在于：所述无N₂O还原酶活性的反硝化细菌保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，分类学命名为pseudomonas.chlororaphis subsp Aureofaciens(绿针假单胞菌金色亚种)，保藏编号为CGMCC1.3351。