[发明专利]一种抗alpha-烯醇化酶抗体层析试纸条及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测抗alpha-烯醇化酶抗体免疫层析检测试纸、制备方法及其应用。

背景技术

烯醇化酶(enolase)是1934年Lohman和Mayerhof在研究肌肉提取物中磷酸甘油酸向丙酮酸转换的过程中发现的。它既可催化糖酵解过程中2-磷酸-D-甘油酸(PGA)向磷酸-烯醇式丙酮酸(PEP)的转化，又可在糖原合成过程中，催化逆向反应，即作为磷酸丙酮酸水合酶，使PEP向PGA转化，因此烯醇化酶在细胞能量代谢过程中起重要的作用【J Biol Chem，2000，275(8)：5958-5965】。在脊椎动物中，烯醇化酶存在3种同功酶：α，β，γ。α-烯醇化酶在许多组织均存在，β-烯醇化酶几乎仅见于肌肉组织，γ-烯醇化酶则主要存在于神经元和神经内分泌组织。根据它们的分布和作用不同，α-烯醇化酶又称为非神经元烯醇化酶(non-neural enolase，NNE)、enolase 1(eno-1)、磷酸烯醇丙酮酸脱氢酶(phosphopyruvate hydratase)、c-myc启动子结合蛋白(c-myc promoter-binding protein，MBP-1)、纤维蛋白溶酶原结合蛋白(plasminogen-binding protein)。

NNE在结构上高度保守，除了作为糖酵解反应的限速酶，还作为自身抗原参与机体免疫反应。研究证明，多种自身免疫病均可检出抗NNE抗体。NNE作为一种自身抗原，既是胞浆酶，又可表达于肾脏、血管等组织及一些细胞如内皮细胞膜或与细胞表面结合。抗NNE自身抗体通过识别NNE的膜联形式和/或干扰它的功能而于局部诱发免疫炎性反应。自身免疫性视网膜病变患者体内存在抗NNE抗体，并特异定位于视网膜神经节细胞层及内核层，诱导该区域细胞凋亡，导致失明【J Autoimmun，2004，23(2)：161-167】。存在于人呼吸道上皮细胞中的NNE自身抗原诱导的自身免疫反应，造成呼吸道上皮细胞损伤，诱发气道炎症反应，参与重症哮喘和阿斯匹林敏感性哮喘的发生【JAllergy Clin Immunol，2006，118(2)：376-381】。类风湿性关节炎患者的关节滑膜中可见大量的NNE表达，作为一种自身抗原，NNE发生氨基甲酰鸟氨酸化，并刺激机体产生特异性自身抗体，从而引发类风湿性关节炎的慢性炎症反应【Arthritis Res Ther，2005，7(6)：1421-1429】。研究还发现，大约有10-18％的炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)血清中抗NNE抗体阳性【Clin Exp Immunol.1998；112：10-16】。

目前实验室常用的检测抗NNE的方法是酶联免疫吸酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)和免疫印迹法(immunoblotting test，IBT)。尚未发现有商品化的 抗NNE抗体检测试剂盒。

ELISA法检测可用于高通量标本测定，灵敏度也较高，目前被广泛认可，但操作比较繁琐，需多次加样和洗涤，完成整个实验过程需三小时左右，且易受温度和孵育条件的影响，需酶标仪，亦需要专业免疫学技术人员在专业实验室中进行实验操作，给实验带来诸多不便。

免疫印迹法综合了SDS-PAGE的高分辨力和ELISA法的高特异性和敏感性，但操作相对复杂，完成整个实验过程需三小时左右，亦需要专业免疫学技术人员在实验室中进行实验操作，同时易受各种温度和孵育时间等环境条件因素的影响，对试验带来诸多不便。且试剂具有较强的毒性和污染性。

免疫层析法(immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、乳胶等等，其中以纳米金应用最为广泛。

与其他检测方法相比，免疫层析法检测时间短，只需要5～20分钟，操作人员无需培训，操作简便、快速，无需低温保存，储运方便等优势。

在自体免疫性疾病诊断方面，已出现较多的免疫层析试纸，但抗NNE抗体的免疫层析试纸在国内外市场上仍没有问世。

发明内容