[发明专利]一种抗I2抗体层析试纸条及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析检测领域。具体而言，本发明涉及一种检测抗I2抗体免疫层析检测试纸、制备方法及其应用。 

背景技术

炎症性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)是一种病因尚不十分清楚的慢性非特异性肠道炎性疾病，包括溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)和克罗恩病(Crohn′s disease，CD)。克罗恩病于1932年由Crohn、Ginzterg和Oppenheime最早描述，故得此名。1973年，世界卫生组织医学科学国际组织委员会将本病定名为Crohn病。其特点为病因未明，多见于青年人，表现为肉芽肿性炎症病变，合并纤维化与溃疡。可侵及全胃肠道的任何部位，包括口腔、肛门，病变呈节段性或跳跃性分布，并可侵及肠道以外，特别是皮肤。临床表现因病变部位、范围及程度不同而多样化，病程缓慢，易复发。 

IBD是北美和欧洲的常见病，近30年来日本IBD发病率亦呈逐步增高趋势，我国虽尚无普通人群的流行病学资料，但近10多年来本病就诊人数呈逐步增加趋势则非常明显。IBD的临床表现复杂多样，不仅有消化道症状，还可有肠外表现。由于症状为腹痛、腹泻、便血等非特异性肠炎表现，CD与UC、以及IBD与结核性肠炎等其他肠道慢性疾病很难鉴别诊断，特别在缺乏组织学证据时，需有更多相对特异性的标志物为诊断提供帮助。研究发现，多种非侵入性的生物活性标志物对IBD的诊断及炎症活动性的评价具有重要意义。 

目前鉴别UC与CD的生物标志物主要集中在自身免疫抗体与抗微生物抗体，I2(Pseudomonas-associated sequence I2)是一种在活动性CD患者病变肠黏膜上发现的蛋白，通过氨基酸序列分析，发现I2是一种肠道正常菌荧光假单胞菌(pseudomonas fluorescens)pfiT基因的一段序列。研究表明，大约有20～30％CD患者血清抗I2的IgA抗体阳性，而在正常人和非CD肠道疾病患者中的抗I2的IgA抗体极少被检测到。因此，抗I2的IgA抗体检测是CD诊断的有效指标之一。 

发明专利“一种IgA抗体检测试剂盒”(申请号201310062239.7)首次公布了I2的四段抗原序列，并用化学发光法实现了对样品中抗I2抗体IgA的检测，本发明在此基础上用基因重组方法获得I2抗原蛋白，并用该抗原蛋白实现了抗I2抗体的免疫层析检测。与对比文献化学发光法相比，本发明所用的抗原蛋白比201310062239.7发明专利公布的抗原表位更多，提示用同样方法检测时，灵敏度更高；其次，本发明用胶体金/彩色胶乳标记制备的免疫层析试纸条，使检测更为简便。 

免疫层析法(Immunochromatography)是近几年来兴起的一种快速诊断技术，其原理是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的纤维素一端浸入样品(尿液或血清)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，形成肉眼可见的检测带。现有的免疫层析试纸条产品常用的示踪标记粒子有纳米金、纳米硒、彩色胶乳等等，其中以纳米金应用最为广泛，纳米金也称为胶体金。 

以胶体金作为失踪标记物的免疫层析技术特称为免疫胶体金技术(Immune colloidal gold technique，GICT)。胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态而得名。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合，如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 

表面带活性基团的彩色胶乳微球也可以作为免疫层析的示踪剂，与胶体金技术一样，彩色胶乳标记免疫层析技术也具有操作简便、试剂稳定、快速出结果、可室温保存等优点。彩色胶乳标记是将不同直径范围0.1μM～1μM彩色胶乳微球与含有羧基、氨基、羟基等酯类或其他大分子物质共价结合，使这些大分子标记上颜色，当在检测线或质控线上富集停留后形成肉眼可见的彩色条带。