[发明专利]一种抗OmpC抗体检测试纸的制备方法及用途

权利要求书

1.一种抗OmpC抗体免疫层析试纸条，包括样品垫(1)、结合垫(2)、分析膜(3)、吸水垫(6)、底板(7)、检测带(4)和质控带(5)，所述底板(7)的上部贴合有分析膜(3)，所述分析膜(3)上部的两端分别贴合有结合垫(2)和吸水垫(6)，所述结合垫(2)上部的一端贴合有样品垫(1)，所述检测带(4)和质控带(5)设置在分析膜(3)上，其特征在于，OmpC抗原蛋白结合在结合垫(2)上或包被在检测带(4)上。

2.根据权利要求1所述的OmpC抗体检测试纸条，其特征在于，所述的结合垫为1层，如图1所示与分析膜搭接，或者分上(2a)、下(2b)两层与分析膜错落搭接(图2)。

3.根据权利要求1所述的OmpC抗体检测试纸条，其特征在于，所述的检测带(4)设1条(图1)或2条(图3)。

4.一种抗OmpC抗体免疫层析试纸条的制备方法，包括如下步骤：

步骤1.OmpC抗原蛋白的制备

步骤2.结合垫(2)制备

(1)胶体金标记物的制备：用纳米金溶液标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)，以及其他与检测带和质控带能形成免疫复合物的蛋白。

(2)胶乳标记物的制备：用带活性基团的胶乳微球标记OmpC抗原蛋白、抗人IgG抗体、抗人IgA抗体、葡萄球菌A蛋白(SPA)、链球菌G蛋白(Protein G)，以及其他与检测带和质控带能形成免疫复合物的蛋白。

(3)结合垫(2)制备：玻璃纤维膜或聚脂膜作为结合垫，将步骤(1)制备的胶体金标记物或胶乳标记物，用喷涂仪喷涂在预处理的玻璃纤维膜或聚脂膜上，干燥备用。

步骤3.分析膜(3)制备

A.检测带(4)制备：根据结合垫标记蛋白类型选择检测带包被蛋白，如结合垫上的结合蛋白含OmpC，检测带的包被蛋白是抗人IgG抗体或/和抗人IgA抗体；如果结合垫上含有抗人IgG抗体或/和抗人IgA抗体，检测带包被蛋白为OmpC抗原蛋白。

B.质控带(5)制备：根据结合垫的标记蛋白类型选择质控带的包被蛋白，如结合垫标记蛋白是单一的OmpC，质控带的包被蛋白为抗OmpC的抗体；如果结合垫标记蛋白是单一的抗人IgG或/和抗人IgA抗体，质控带的标记蛋白为对应的抗人IgG或IgA抗体的抗体；结合垫标记蛋白有2层时，质控带的包被蛋白是能与结合垫对应层结合蛋白形成免疫复合物的蛋白。

步骤4.样品垫制备

将玻璃纤维膜或聚酯膜经缓冲液浸渍烘干备用，或者直接使用。

步骤5.试纸条组装

把步骤1～4所制作完成的材料，按图1或图2搭接，根据底板的规格切割成一定的长度和宽度，安装在底板和卡壳里。

5.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的OmpC抗原蛋白是把全长OmpC基因或者含有重要抗原表位的基因序列，克隆到原核或真核表达载体里，表达纯化获得。

6.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的OmpC抗原蛋白是用多肽合成仪合成含有OmpC重要抗原表位的OmpC多肽，并偶联到载体蛋白上而获得，载体蛋白包括但不限于牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OA)、钥孔血蓝蛋白(KLH)、人血清白蛋白(HSA)及人工合成的多聚赖氨酸(PLL)等。

7.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗人IgG和IgA抗体为鼠源、兔源、羊源、马源、骆驼源或豚鼠源中的一种或多种单克隆抗体或多克隆抗体。

8.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗OmpC的抗体是以OmpC为免疫源产生的抗体，或者能与OmpC形成免疫复合物的蛋白。

9.根据权利要求4所述的免疫层析试纸条，其特征在于，所述的抗人IgG和IgA抗体的抗体是指能与该抗体形成免疫复合物的蛋白。

10.一种抗OmpC抗体检测方法，其特征在于，用权利要求1-9所述的免疫层析试纸条，对待检样品进行检测，具体步骤包括：

(1)样本处理：取血清、血浆或全血样本，用加样缓冲液稀释0～100倍；

(2)把样品滴加到试纸条的样品垫上，静置5～30分钟，观察T线和C线；

(3)结果判读：T线和C线均显现，结果为阳性；T线不显现，C线显现，结果为阴性；T线和C线均不显现或其他现象，提示试纸失效。