[发明专利]苯丙氨酸检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，特别是涉及一种苯丙氨酸检测试剂盒。

背景技术

苯丙氨酸是α-氨基酸的一种，具有生物活性的光学异构体为L-苯丙氨酸(L-Phenylalanine)。苯丙氨酸是人体必需氨基酸之一。L-苯丙氨酸在生物体内可被辅酶四氢生物喋呤不可逆地转化为L-酪氨酸(L-Tyrosine)，后继续分解，经转氨基生成少量苯丙酮酸，但先天性苯丙氨酸羟化酶缺陷患者，苯丙氨酸不能羟化生成酪氨酸，苯丙酮酸生成就增多，在血和尿中出现苯丙酮酸，导致智力发育障碍，称为苯丙酮尿症(PKU)。

从1961年美国Guthrie创立细菌抑制法测定干燥滤纸血片中苯丙氨酸浓度筛查苯丙酮尿症以来，有许多方法应用于检测血斑苯丙氨酸，据卫生部临床检验中心的统计，主要有细菌抑制法(BIA)、荧光法、酶/比色法、高效液相色谱法、串联质谱法、高效毛细管电泳、酶电极分析法等。目前，比较常用的是前两种方法，但细菌抑制法耗时长，仅能半定量。目前国内所采用荧光显色检测新生儿检测试剂盒全部靠国外进口产品，往往与特定检测仪器配套使用，而不能用于其它检测仪器，而且该试剂盒和所配套仪器设备价格昂贵，不利于新生儿筛查的普及，非一般的新生儿疾病筛查中心所能承担，同时，该进口试剂盒在液体配制中加有叠氮钠作为防腐剂，在实际操作中对人具有一定危险。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种苯丙氨酸检测试剂盒。该试剂盒可应用于苯丙氨酸浓度的定量检测，包括新生儿血斑样本中的苯丙氨酸浓度的定量检测。

为解决上述技术问题，本发明的苯丙氨酸检测试剂盒，包括：琥珀酸溶液、茚三酮溶液、二肽溶液(L-亮氨酰-L-丙氨酸溶液)、铜试剂、校准品血片和质控品血片。

所述琥珀酸溶液是含有Proclin300的琥珀酸溶液，其中，Proclin300在琥珀酸溶液中的体积浓度优选为0.4％～0.6％，琥珀酸在琥珀酸溶液中的浓度优选为141g/L～142g/L(更优选1.2M)，琥珀酸溶液的pH优选为5.7～5.9。

所述琥珀酸溶液中，1L琥珀酸溶液的制备方法如下：

取琥珀酸141～142g，用配制总体积70％～80％的水溶解后，使用氢氧化钠(85～88g)调pH值至5.8±0.1，加入Proclin300，搅拌均匀后，用水定容至1L，获得琥珀酸溶液，其中，Proclin300的终体积浓度为0.4％～0.6％。

所述茚三酮溶液是含醋酸锂和二甲基亚砜的茚三酮溶液。其中，醋酸锂的浓度优选为81g/L～82g/L,二甲基亚砜的体积浓度优选为19.8％～20.2％，茚三酮的浓度优选为117mM～124mM(更优选为120mM)，茚三酮溶液的pH优选为5.7～5.9。

所述茚三酮溶液中，1L茚三酮溶液的制备方法如下：

1)取醋酸锂81～82g，用配制总体积50％～60％的水溶解后，用浓盐酸(2.4～2.5mL)调pH值至5.8±0.1，得醋酸锂溶液；

2)取水合茚三酮，用198～202mL二甲基亚砜溶解后，倒入上述1)制备的醋酸锂溶液中，混匀，用水定容至1L，得茚三酮溶液，其中，茚三酮的终浓度为117mM～124mM。

所述二肽溶液是L-亮氨酰-L-丙氨酸的琥珀酸溶液，其中，L-亮氨酰-L-丙氨酸的浓度优选为4g/L～4.1g/L(更优选为24mM)，具体制备方法如下：取L-亮氨酰-L-丙氨酸4～4.1g，用上述琥珀酸溶液溶解并定容至1L，得二肽溶液。

所述铜试剂是含有碳酸钠、酒石酸钾钠和硫酸铜的溶液，其中，碳酸钠的浓度为7.5g/L～8.5g/L，酒石酸钾钠的浓度为0.37g/L～0.41g/L，硫酸铜的浓度为0.28g/L～0.32g/L。

所述校准品血片和质控品血片的制备方法如下：