[发明专利]用于肠道病毒CoxB5的RT-LAMP检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，尤其是涉及一种用于实验室诊断肠道病毒CoxB5的RT-LAMP检测试剂盒。

背景技术

研究显示，肠道病毒是导致病毒性脑炎爆发的主要病毒，全球各地每年都有肠道病毒导致的病毒性脑炎发生，在希腊、韩国、斯洛伐克、台湾地区、香港地区、印度和中国大陆均有发生，血清型各不相同。2006年，河南省信阳市爆发了一起由肠道病毒CoxB5（柯萨奇B5）引起的病毒性脑炎。在随后的2010年和2011年连续两年，平顶山市和漯河市又分别爆发了一起由肠道病毒CoxB5引起的病毒性脑炎。2013年，在河南省安阳市也爆发了一起由肠道病毒CoxB5引起的病毒性脑炎。种种现象表明，肠道病毒CoxB5在河南省已经形成一定的规模，逐渐呈现出一种长期的、大范围流行的趋势。

肠道病毒CoxB5的感染者轻者可致低烧，重者可出现小儿麻痹、脑炎、心肌炎和呼吸衰竭等等。人类对肠道病毒CoxB5普遍易感，而且目前肠道病毒CoxB5既没有常规监测，也没有常规计划免疫提供。鉴于这样的流行趋势、临床表现和免疫现状，肠道病毒CoxB5可能会成为河南省一个新的突发公共卫生事件的热点。但针对这种严重的现状，现有的检测方法却费时费力，成本高昂，不能满足现场快速诊断的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于肠道病毒CoxB5的RT-LAMP检测试剂盒，本试剂盒能够快速、简便、敏感、特意的检测病毒性脑炎患者中的肠道病毒CoxB5，为突发公共卫生事件的处理提供准确的实验室诊断依据。

为实现上述目的，本发明可采取下述技术方案：

本发明所述的用于肠道病毒CoxB5的RT-LAMP检测试剂盒，包括六种反应引物，所述六种反应引物依次为：

FIP：GTTGGTGGACGTCTGCCAGCGGTGCCCACGAAAGTGAA；

F3：TGTATGTGCCCCCAGGT；

BIP：AAGACATGGGTCCCAAGACCACTTCTGGTACTGGCACAACCT；

B3：TCAGTCACGCCAGTAGGTT；

F1C：GTTGGTGGACGTCTGCCAGC；

B1C：AAGACATGGGTCCCAAGACCAC。

所述反应引物FIP是基于肠道病毒CoxB5 VP1基因3' 端的F2c和Flc区设计而成，由F2区和F1C区组成，F2区与F2c区互补，F1C区与Flc区序列相同；所述反应引物F3是基于肠道病毒CoxB5 VP1基因3' 端的F3c区设计而成，与F3c区互补；所述反应引物BIP 是基于肠道病毒CoxB5 VP1基因5' 端的Bl和B2区设计而成，由B1C和B2区组成，B1C区与Blc区序列互补，B2区与B2区序列相同；所述反应引物B3是基于肠道病毒CoxB5 VP1基因5' 端的B3区设计而成，和B3c区互补；所述反应引物FIC和BIC是分别基于肠道病毒CoxB5 VP1基因3' 端的F2c区和5’端的B2区设计而成，分别与F2c区和B2区互补。

LAMP针对肠道病毒CoxB5 VP1基因设计引物，肠道病毒VP1区段是肠道病毒中和抗原位点主要所在区域，也是肠道病毒基因型别的决定区域。针对该区域设计的引物保证了检测的特异度。同时，LAMP引物的设计主要是基于肠道病毒CoxB5 VP1基因区域3’端的F3c、F2c和Flc区以及5' 端的Bl、B2和B3区等六个不同的位点设计的六种引物。

本发明的优点主要体现在以下几点：

1、灵敏度高：测试结果显示，肠道病毒CoxB5的RT-LAMP检测试剂盒的灵敏度比传统的RT-PCR方法高2～5个数量级；

2、特异性好：本发明以肠道病毒CoxB5标准株、肠道病毒CoxB5河南省标准株和肠道病毒CoxB5型河南省流行株为模板，针对肠道病毒CoxB5型VP1区设计引物，引物特异性好、准确性高；

3、简便安全：操作简单、安全，无需专门的仪器设备，结果可直接通过肉眼观察；

4、快速直观：速度快，可在30~60min内完成，比PCR节约至少60min。

附图说明

图1是本发明的工作原理图。

图2是RT-LAMP的特异性结果图。

图3是RT-LAMP的敏感性结果图。

具体实施方式