[发明专利]一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：试剂盒包括磁珠法核酸提取试剂盒和TB核酸扩增试剂盒，其中磁珠法核酸提取试剂盒包括裂解结合液、漂洗液、洗脱液、磁珠液；TB核酸扩增试剂盒包括TB-PCR反应液、酶混合液、TB-内标、阴性质控品、临界阳性质控品、强阳性质控品。

2.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述磁珠法核酸提取试剂盒中裂解结合液组成为含有十二烷基肌氨酸钠0.5-2.5%，Triton X-100 0.5-2.5ml/100ml，异硫氰酸胍2-6.0mol/L,EDTA（PH7.5）1-10 mM，HCl 0.1-0.3M；所述磁珠法核酸提取试剂盒中漂洗液组成为含有Triton X-100  0.5-2.0ml/100ml，氯化钠0.1-0.3mol/L，60-80%乙醇；所述磁珠法核酸提取试剂盒中洗脱液组成为含有10mmol/L Tris.HCl（PH8.3），0.01-0.05% Prolin300；所述磁珠法核酸提取试剂盒中磁珠液组成为直径为1μm的氧化硅超顺纳米磁珠，浓度为10-40mg/ml。

3.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述TB核酸扩增试剂盒中TB-PCR反应液包括用于检测靶基因和内标的探针、用于扩增靶基因和内标的上游引物以及下游引物、PCR缓冲液；TB核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针序列为：5-ctgcccactccgaatcgtgctgacc-3（SEQ ID NO:1），5'端标记为FAM荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于内标检测的探针序列为：5'-CAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGC-'3（SEQ ID NO:2），5'端标记为HEX荧光发生基团，3'端标记为BHQ1荧光淬灭基团；用于扩增靶基因的上游引物序列为：5-tgcggatggtcgcagagatcc-3（SEQ ID NO:3）；用于扩增靶基因的下游引物序列为： 5-agtagacgggcgacctcactg-3 （SEQ ID NO:4）；用于扩增内标的上游引物序列为：5'- TTCGATCTCCGTCGAACCTTG-'3（SEQ ID NO:5）；用于扩增内标的下游引物序列为：5'-ttctcaggactccagtcgcTG-'3（SEQ ID NO:6）。

4.根据权利要求1或3所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述TB核酸扩增试剂盒中用于检测靶基因的探针使用浓度为5-20pmol，优选靶基因探针使用浓度为8pmol；所述用于检测内标的探针使用浓度为5-20pmol，优选内标探针使用浓度为8pmol；所述用于检测靶基因的上下游引物使用浓度为10-30pmol，优选靶基因的上下游引物使用浓度为20pmol；所述用于检测内标的引物使用浓度为5-20pmol，优选内标引物使用浓度为8pmol。

5.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述TB核酸扩增试剂盒中PCR缓冲液组成为30mmol/L Tris-HCl（PH8.3），10mmol/L(NH4)₂SO₄，30mmol/L KCl，3mmol/L MgCl₂，0.15mmol/L dNTPs。

6.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述TB核酸扩增试剂盒中酶混合液包括热启动Taq酶、尿嘧啶糖基化酶（UNG）；其中热启动Taq酶的用量为3-8U/人份，尿嘧啶糖基化酶的用量为0.05-0.2U/人份。

7.根据权利要求1所述的一种结核分枝杆菌（TB）核酸检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中TB内标是将序列5'-TTCGATCTCCGTCGAACCTTGCACTCTGCATCCTGGACTCATGCTGACTGCAGACTCCACATCGACCCTACCCGACTGCTCTACTGCACTCCTGCGTCATCACgcgactggagtcctgagaa-'3（SEQ ID NO:7）插入到pUC18T 载体而构成的重组体；TB内标质粒使用浓度为100-500copies/次，优选使用浓度为200copies/次。