[发明专利]一组结节病血清特异性标志蛋白及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术和医学检验领域，涉及用于识别结节病的检测标志物及其检测试剂盒。尤其涉及一组结节病血清特异性标志蛋白及其检测试剂盒。

背景技术

临床研究显示，结节病病因不明，以非干酪性上皮样肉芽肿为病理特征，全身各个器官几乎均可受累，其中最为常见的受累器官是肺脏和胸内淋巴结。由于结节病临床表现多样且缺乏特异性，其确诊主要依靠排他性诊断，需要除外许多其他肉芽肿性疾病，其中最为困难的是结节病与菌阴结核病的鉴别诊断，尤其在中国这样的结核病高发国家显得更为突出。目前对于两者的鉴别诊断多集中在寻找结核杆菌的证据方面，而且多侧重于结核病的标志物的研究。有研究报道，结节病血清标志物有血清可溶性白细胞介素受体2(sIL-2R)，血清血管紧张素转化酶(SACE)和II型肺泡细胞表面抗原6(KL-6)等，但实践证实，这些标志物的敏感性和特异性并不理想，并且对于结节病和结核病的鉴别诊断方面未见后续报道。还有研究通过实时定量PCR方法检测结节病和结核病病理组织中结核分枝杆菌DNA，从病理组织角度建立结节病和菌阴结核病的鉴别诊断方法；以及通过建立临床-影像-病理综合评分系统用于二者的鉴别诊断，所述方法可以用于解决部分结节病与菌阴结核病的鉴别难题，但仍然存在假阳性和假阴性的问题，并且所述方法必须以取得病理活检为应用前提，而病理活检的方式及病理医师诊断经验常会对诊断的正确率产生很大的影响；

本申请的的发明人之前的研究中用结节病患者血清标本筛选出血清淀粉样物质A(SAA)作为诊断标志物，其诊断结节病特异度仅为52.5％，作为单一的指标用于结节病的诊断明显不足。

因此，寻找一种更为特异、敏感、简便、可靠的用于上述两种疾病的鉴别诊断的检测试剂及其检测试剂盒已成为本领域研究人员较为关注的问题。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种用于识别结节病的检测标志物及其检测试剂盒。

本发明中，所述的检测试剂含有一组或一组以上的相关结节病与结核病的血清学差异蛋白，本发明的实施例中筛选相关结节病与结核病的血清学差异蛋白瘦素(leptin)及细胞间粘附分子1(ICAM-1)。

本发明的另一目的是提供含有上述检测试剂的检测试剂盒。

所述的检测试剂盒包含固相和上述相关结节病与结核病的血清学差异蛋白，本发明的实施例中优选血清学差异蛋白leptin及ICAM-1。

本发明的另一目的是提供上述相关结节病与结核病的血清学差异蛋白leptin及ICAM-1在制备用于鉴别诊断结节病的检测试剂中的用途。

本发明通过下述技术方案实现：

利用蛋白芯片技术，将筛选出的差异蛋白用酶联免疫吸附试验(ELISA)以及免疫组化(IHC)的方法验证后，筛选其中的相关结节病与结核病的血清学差异蛋白，本发明的实施例中优选血清学差异蛋白leptin及ICAM-1；进一步的进行所述的差异蛋白的血清浓度数据的统计学分析处理以及平行试验与序列实验的灵敏度及特异度分析处理，确定相关结节病与结核病的血清学差异蛋白，尤其是差异蛋白leptin及ICAM-1联合用于检测结节病与结核病的血清浓度，为鉴别结节病和菌阴结核病提供便捷的特异度及灵敏度高的检测试剂以及检测试剂盒。

本发明中，还提供了采用所述的检测试剂以及检测试剂盒对于结节病以及菌阴结核病进行检测的方法及其模型。

本发明通过检测血清中差异表达的蛋白，联合采用统计学的方法分析处理，在不需取得活检组织的情况下，仅仅通过检测患者的血清蛋白，既能在一定程度上获得两种疾病的血清蛋白之间的差别后，基于受试者工作特征曲线(ROCcurve)对制备的诊断试剂及其试剂盒的检测效力进行评价。

本发明中将上述的相关结节病与结核病的血清学差异蛋白，尤其是差异蛋白leptin及ICAM-1运用ROC曲线、逻辑回归(logisticregression)及平行序列实验分析等统计学方法建立一组鉴别模型，对所述的差异蛋白的血清浓度数据以及平行试验与序列实验的灵敏度及特异度分析处理，确定相关结节病与结核病的血清学差异蛋白表达的差异，尤其是差异蛋白leptin及ICAM-1联合或单独使用的差异，分析结果有利于鉴别诊断参考。

本发明中，采用所述的检测试剂盒通过下述步骤对结节病以及菌阴结核病进行检测：

1)包被

取所要包被的商品化leptin和ICAM-1抗体，设计所需浓度，根据各包被孔数计算所需包被物的量，用包被液稀释至所需体积，分加至各孔中：