[发明专利]一种应用凡纳滨对虾仔虾测试杀生物活性物质急性毒性的方法

说明书

技术领域

本发明属于生态毒理测试领域，具体涉及一种应用凡纳滨对虾仔虾测试杀生物活性物质急性毒性的方法。 

背景技术：

防污漆为控制海洋生物污损做出了巨大贡献，但其含有的杀生物活性物质的大量使用对周围海洋环境和水体产生了较大不利影响，杀生物活性物质对海洋生态环境和人类健康造成的潜在风险日益受到广泛关注。为了有效控制防污漆活性物质给海洋环境带来的不利影响，为研发和筛选环境友好型活性物质提供技术支持，亟需加强对海洋生物生态毒理测试方法的研究和开发。相对淡水生态系统而言，海水生态系统中的生物种类更为丰富，很多门类的生物只存在于海水生态系统中，这意味着海水生物的生物敏感性分布范围更广。但目前我国水生生物毒性测试方法采用的受试生物大多是淡水鱼、溞和藻类，针对海水生物的标准毒性测试方法较少。 

凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)是世界上三大经济虾类之一，对虾养殖已成为我国海水养殖的支柱产业之一。 

目前，国内尚没有杀生物活性物质对凡纳滨对虾急性毒性的标准方法以及相关的研究报道。不过针对某些化合物对凡纳滨对虾的毒性影响已有一些研究，但大部分研究均使用成虾作为毒性试验的受试生物，并未应用敏感性更强的仔虾。只有少数研究应用凡纳滨对虾仔虾进行试验，如么宗利等探讨了碳酸盐碱度和pH值对凡纳滨对虾仔虾存活率的影响，郭永军研究了高锰酸钾、甲醛和聚维酮碘等3种药物对凡纳滨对虾仔虾的急性毒性，但上2篇研究 报道中凡纳滨对虾仔虾的驯养条件、试验条件、试验设施、方法设计和质量控制要求等关键性技术内容或缺失或不完整，无法作为标准的试验方法用于开展杀生物活性物质的毒性测试，获得的毒性数据的质量也无法保证。 

国外关于对虾仔虾毒性试验的方法基本采用流水式试验方式，例如美国环保局(USEPA)发布的针对杀虫剂等有害化学品的对虾急性毒性试验方法。但由于流水式试验体系需要的样品量、溶液量和产生的废液量均较大，所需的流水式试验装置也较为复杂，对试验过程的控制性和精密性要求也较高，试验费用十分昂贵，因此流水式试验体系尚不具备作为急性毒性试验开展的普遍性。 

发明内容：

本发明的目的是提供一种简便、经济、快速、较为标准的应用凡纳滨对虾仔虾测试杀生物活性物质急性毒性的方法，从而克服传统成虾急性毒性测试方法中受试生物个体大，数量少，个体差异大，重现性差等不足，为杀生物活性物质海水生物急性毒性测试提供技术保障。 

本发明利用仔虾对污染物刺激的敏感性，以海水生物凡纳滨对虾仔虾为模式生物，在一定的试验条件下，将仔虾暴露于含有杀生物活性物质的一系列浓度的试验用水中，以静态或半静态方式进行试验，并采用了合适的受试生物要求、试验条件、受试物溶液配制、浓度设计、试验周期、毒性终点、测定指标和质控要求，确定活性物质对凡纳滨对虾仔虾毒性的剂量-效应关系，从而实现了本发明的目的，为海洋环境风险评估提供高质量的数据。 

本发明的应用凡纳滨对虾仔虾测试杀生物活性物质急性毒性的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

受试生物：健康的、活力好的、出生小于10天的凡纳滨对虾仔虾经驯养后作为受试生 物用于受试； 

试验用水：采用取自清洁无污染海区水质稳定的海水或人工配制海水作为试验用水； 

将受试物用试验用水稀释成不同的梯度浓度，然后再加入受试的凡纳滨对虾仔虾，试验期间不更换试验溶液或者试验期间定时更换新的试验溶液，试验环境条件为：光照周期为12h光照/12h黑暗，15～30min的过渡转换期；温度范围为23～30℃，温度变换范围不超过2℃，盐度为20～35‰；盐度变化范围不超过2‰；pH为7.6～8.6，变化范围不宜超过0.4；溶解氧含量不低于空气饱和浓度的60％，试验期间仔虾正常喂食； 

试验开始后，定时测量受试仔虾的死亡率，计算累积死亡率，以评估受试物的急性毒性。