[发明专利]一种诱导多能干细胞的培养基及其用途

权利要求书

1.人参皂苷单体Rb1在体外提高多能干细胞的诱导效率中的用途，其特征在于，将所述人参皂苷单体Rb1添加到常规的多能干细胞诱导培养基中，然后使用该培养基培养导入多能性相关基因的供体细胞，得到诱导多能干细胞。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述培养基为KOSR培养基。

3.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为1-100μM。

4.根据权利要求3所述的用途，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为5-100μM。

5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为25-100μM。

6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为50-75μM。

7.一种提高体外诱导多能干细胞效率的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将多能性相关基因导入供体细胞；

2)将已导入多能性相关基因的供体细胞制备为单细胞悬液，使用添加人参皂苷单体Rb1的常规诱导多能干细胞的培养基培养步骤1)中导入多能性相关基因的供体细胞，得到诱导多能干细胞。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述培养基为KOSR培养基。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为1-100μM。

10.根据权利要求9所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为5-100μM。

11.根据权利要求10所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为25-100μM。

12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为50-75μM。

13.根据权利要求7-12中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括鉴定诱导多能干细胞的步骤。

14.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤1)是通过包括以下步骤的方法实现的：

a.将供体细胞接种到含有SP的10％DMEM培养液中；

b.一天后，将所述含有SP的10％DMEM培养液换成不含SP的10％DMEM，并使用含有多能性相关基因的病毒感染供体细胞；

c.24小时后，弃去含有病毒的培养液，换上含有SP的10％DMEM，隔天再换液一次；

d.自感染后第六天得到感染好的供体细胞。

15.根据权利要求14所述的方法，其中步骤a.中，所述细胞的接种密度为1.5-2×10⁴/cm²。

16.根据权利要求14所述的方法，其中步骤b.中，所述多能性相关基因为Klf4、Sox2、Nanog和Oct4。

17.根据权利要求14所述的方法，其中步骤b.中，在感染的同时，加入8μg/ml聚凝胺。

18.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2)是通过包括以下步骤的方法实现的：

Ⅰ)将已导入多能性相关基因的供体细胞制备为单细胞悬液，并接种到饲养层细胞上；

Ⅱ)将步骤Ⅰ)中接种好的细胞使用10％DMEM的培养液培养1-2天；

Ⅲ)弃去10％DMEM的培养液，使用添加人参皂苷单体Rb1的常规诱导多能干细胞的培养基培养细胞；

Ⅳ)每隔一天更换一次培养基；

Ⅴ)培养3-4天后，得到诱导多能性干细胞克隆。

19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述培养基为KOSR培养基。

20.根据权利要求18所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为1-100μM。

21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为5-100μM。

22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述培养基中人参皂苷单体Rb1的浓度为25-100μM。