[发明专利]侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1及其编码基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1及其编码基因和应用。

背景技术

本发明所述的侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)A60菌株是本实验室从海南昌江土壤中分离出的高活性生防菌株，已经于2012年1月9日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)进行了保藏，登记入册编号CGMCC No：5694。本实验室已成功从A60代谢产物中分离得到一种新型抗菌肽BL-A60。近年来应用生防细菌及其代谢产物开发出来的生防制剂越来越受到人们的关注。生防细菌诱导的系统抗性通常具有广谱性、系统性和非特异性，为多途径利用植物诱导系统抗性防治植物病害开辟了广阔前景。已有报道从生防细菌中筛出可引起植物系统抗性的激发子。但是目前在侧孢短芽孢杆菌中并没有相关发现，所以从A60菌株中寻找一种新的蛋白质激发子是非常必要的，并且可以完善和丰富A60菌株及其代谢产物的生物防治功能，拓展其应用前景。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供本发明的目的是提供一种能够提高植物抗性和诱导植物防御反应的侧孢短芽孢杆菌分泌蛋白质PeBL1及其基因序列和该蛋白及其基因的应用。

一种侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1，其氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO:2所示。

本发明所述的侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1在提高植物系统抗性和诱导植物防御反应中的应用。

本发明所述的应用，其中所述植物为本生烟。

一种多核苷酸，其核苷酸序列为下列所述之一：

(1)编码序列表中SEQ ID NO:2的蛋白质的多核苷酸序列；

(2)与(1)中多核苷酸序列根据碱基配对原则互补的多核苷酸序列。

本发明所述的多核苷酸，其中，编码序列表中SEQ ID NO:2的蛋白质的多核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO:1所示。

一种重组载体，含有本发明所述的多核苷酸。

本发明所述的重组载体，其中所述载体为在pET30载体多克隆位点插入本发明所述的多核苷酸的重组载体。

一种遗传工程的宿主细胞，其含有本发明所述的重组载体。

本发明所述的遗传工程的宿主细胞，其中所述宿主细胞为含有本发明所述的重组载体的大肠杆菌BL21(DE3)。

本发明的蛋白质，是指来自侧孢短芽孢杆菌(Brevibacillus laterosporus)A60的培养液、培养液的上清液或菌体的蛋白质。

本发明侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1与现有技术不同之处在于：

本发明侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1蛋白质可以明显的提高植物的抗性，10μMHis-PeBL1处理本生烟叶3d后接种TMV-GFP，对病斑数及病斑直径的最高抑制率可分别达到42.91％和43.23％。对假单胞杆菌(Pseudomonas syringae)的抑制率达到了29.01％。

下面结合附图对本发明的侧孢短芽孢杆菌A60激发子PeBL1蛋白质及其编码基因和应用作进一步说明。

附图说明

图1为本发明中粗蛋白通过阳离子交换柱HiTrap SP FF的色谱图；实线为吸收值，虚线为洗脱液的百分含量；A、B、C代表三个洗脱峰；

图2为本发明中利用Agilent 1200HPLC高效液相色谱对洗脱峰B进行反相柱层析的谱图；B1、B2、B3、B4、B5代表五个洗脱峰；

图3为本发明中利用Agilent 1200HPLC高效液相色谱对有活性的洗脱峰B5进行纯度检测的谱图；

图4为本发明中洗脱峰B与B5跑tricine-sds-page图谱；M代表Marker；

图5为本发明中在烟草上对不同浓度的His-PeBL1(10μM，5μM，2.5μM，1μM，0.1μM，0.01μM)进行活性监测的结果图；

图6为本发明中分别经过His-PeBL1(实线)和缓冲液(虚线)处理的烟草悬浮细胞活性氧物质的定量检测图；纵坐标为发光强度检测，发光强度越高说明产生的活性氧物质越多，横坐标代表处理时间。

图7为分别经过His-PeBL1和缓冲液(对照)处理的烟草叶片活性氧物质的定性检测图；左部分为对照，右部分为处理；

图8为分别经过His-PeBL1(实线)和缓冲液(虚线)处理的烟草悬浮细胞培养基碱化情况图；