[发明专利]一种缢蛏活性四肽及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种缢蛏活性四肽，其氨基酸系列为：Leu‑Pro‑Gly‑Pro，通过以下步骤制得：新鲜缢蛏去壳取肉，缢蛏肉洗净后捣碎，进行组织匀浆，匀浆后调节匀浆液pH值备用；在上述匀浆液中加入胃蛋白酶进行酶解，获取酶解样品，将所得酶解样品进行超滤，分别收集各分子量段的酶解液组进行冷冻干燥；对各分子量段的酶解液组进行反相高效液相色谱纯化，收集各峰组分并进行氨基酸测序，获得所述缢蛏活性四肽。该缢蛏活性四肽对人前列腺癌PC‑3细胞的最大增殖抑制率可达99.55％，可为抗前列腺癌药物的研究提供理论基础。该缢蛏活性四肽通过生物酶解方式获得，原料来源广泛，成本低，对进一步研究和开发以缢蛏为基础的药物、提供缢蛏的经济价值具有重大意义。

技术领域

本发明涉及生物活性肽领域，尤其涉及一种缢蛏活性四肽及其制备方法和应用。

背景技术

缢蛏(Sinonovacula constricta)俗名蛏子，属瓣鳃纲、异齿亚纲、帘蛤目、灯塔蛤科、缢蛏属，在我国沿海均有分布，产量较大，为我国四大养殖贝类之一。缢蛏肉味鲜美、性寒、营养丰富，富含人体生命活动所需的各种必需氨基酸、不饱和脂肪酸等营养物质可补阴去邪热，治烦闷、冷痢、热痢、妇人产后虚损、虚热等症，具有较高的药用食用价值。

活性肽是由两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物，在人体内起重要生理作用，发挥生理功能，如：调节体内的水分、电解质平衡；促进伤口愈合；修复细胞、改善细胞代谢，能起到防癌作用等。活性肽一般通过酶解生物活性材料获得，郑惠娜等发现食物蛋白通过蛋白酶酶解方式，可以得到功能多样的活性多肽(《海洋蛋白酶解制备生物活性肽的研究进展》，郑惠娜、章超桦、曹文红，水产科学，2008,27(7)，370)。在对缢蛏肉的蛋白酶解产物研究方面，雷晓凌等对缢蛏肉的酶解条件进行研究，发现提取得到的糖胺聚糖对体外培养的HL-60细胞均有一定抑制作用，且随着用量增加抑制作用增强(《缢蛏糖胺聚糖的提取分离及其体外抗肿瘤活性的初步研究》，雷晓凌、吴红棉、范秀萍等，药物生物技术，2004,11(3)：146-149)；张永娟等研究发现提取的缢蛏多肽能促进小鼠胸腺和脾脏发育及迟发型变态反应的发生，提高小鼠碳廓清能力及血清溶血素水平(《缢蛏多肽的免疫调节及抗氧化作用》，张永娟、郑惠娜，时珍国医国药，2011,22(5)：1076-1077)。然而，上述研究一般仅涉及缢蛏蛋白酶解多肽混合物的研究，对具体的功能性多肽单体未进一步进行研究，本申请通过提取缢蛏活性四肽，对缢蛏的抗肿瘤活性进行进一步研究。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对现有技术而提供一种缢蛏活性四肽。

本发明所要解决的第二个技术问题是针对现有技术而提供一种上述缢蛏活性四肽的制备方法。

本发明所要解决的第三个技术问题是针对现有技术而提供一种上述缢蛏活性四肽的应用。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种缢蛏活性四肽，其氨基酸系列为：Leu-Pro-Gly-Pro。

一种如权利要求1所述的缢蛏活性四肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)新鲜缢蛏去壳取肉，洗净后捣碎，按料液比1:1～3加水进行组织匀浆，匀浆后调节匀浆液pH值为2～3.5备用；

(2)在上述匀浆液中加入胃蛋白酶进行酶解，获取酶解样品，酶解温度为30～45℃，加酶量为300～1200U/g缢蛏肉，酶解时间为2～8h，酶解完成后于95～100℃、10～15min进行灭酶；

(3)将上述酶解样品过5KD、8KD超滤膜进行超滤，分别收集分子量大于8KD、分子量为8～5KD以及分子量小于5KD的酶解液组进行冷冻干燥；

(4)对步骤(3)中收集各分子量段的酶解液分别进行反相高效液相色谱纯化，收集各峰组分并进行氨基酸测序，获得所述缢蛏活性四肽。