[发明专利]一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法

权利要求书

1.一种利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，

将高表达腺苷蛋氨酸的酵母菌种接入发酵培养基进行好氧发酵培养，并在培养至9-11h时添加蔗糖至蔗糖终浓度为40-45g/L，在培养至23-25h时开始以1.5g/h的速率连续流加前体L-蛋氨酸直至发酵完成，得到含有高发酵水平腺苷蛋氨酸的发酵液；

此外，还包括以下步骤：

步骤一、细胞破壁，将所得发酵液与一定的浓度为15-30％的酸溶液按照体积比0.8-1.0∶1.0混合，并于3-4℃保持2-3h，进行沉淀分层后取上层清液得到腺苷蛋氨酸粗提液；

步骤二、沉淀提取，将所得腺苷蛋氨酸粗提液与一定量的苦味酸溶液混合，并调节pH值为2.8-2.9，进行沉淀分层后得到腺苷蛋氨酸沉淀；

步骤三、纯化，将所得腺苷蛋氨酸沉淀进行萃取和脱色既得所述腺苷蛋氨酸。

2.如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，所用酵母菌种为保藏编号为CGMCC 5649的酿酒酵母XJK12。

3.如权利要求2所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，所述酵母菌种在接种发酵培养基之前先接种于种子培养基进行液体培养，160-180r/min，26-30℃培养20-24h得到种子液；

其中所述种子培养基包含以下重量份的组分：蔗糖15-20，酵母粉4-6，磷酸氢二铵2-3，硫酸镁0.8-1.0，磷酸氢二钾0.8-1.0，磷酸二氢钾0.8-1.0及蒸馏水900-1000。

4.如权利要求3所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，将种子液按照发酵培养基5-10％的比例接种于发酵培养基，发酵培养条件为：温度26-28℃，通气量1-2L/min，转速300-500r/min，发酵时间46-50h，溶氧量不低于30％；

所述发酵培养基包括以下重量份的组分：蔗糖25-30，酵母粉10-15，磷酸氢二铵8-10，硫酸镁3-5，玉米浆12-16，磷酸氢二钾0.8-1.0，磷酸二氢钾0.8-1.0，ZnSO₄·7H₂O 0.08-0.1，FeSO₄·7H₂O 0.08-0.1，CaCl₂ 0.08-0.1，MnSO₄ 0.08-0.1及蒸馏水900-1000。

5.如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤一中进行细胞破壁的酸溶液可为三氯乙酸、乙酸乙酯、高氯酸或硫酸溶液。

6.如权利要求5所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤一中进行细胞破壁的酸溶液为15-20％三氯乙酸溶液，细胞破壁后通过4000-5000r/min离心10-20min进行沉淀分层，离心时温度保持3-4℃。

7.如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤二中所加苦味酸溶液为含有饱和苦味酸的丁酮溶液，加入苦味酸的量以苦味酸与发酵液中腺苷蛋氨酸的摩尔比为2-4为准。

8.如权利要求1所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤三中所述萃取方法为：

步骤一、将所得腺苷蛋氨酸沉淀、纯丁酮及0.4-0.5mol/L的硫酸溶液按照体积比0.8-1.0∶0.8-1.0∶0.8-1.0混合，得到含有水溶性腺苷蛋氨酸硫酸盐的萃取水相；

步骤二、在所得萃取水相中加入纯丁酮进行洗涤，同时在有机相中加入可提高萃取效果的纯乙酸乙酯，得到去除苦味酸的腺苷蛋氨酸硫酸盐。

9.如权利要求8所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，步骤三中所述脱色的方法为：

将经过萃取及洗涤所得腺苷蛋氨酸硫酸盐进行树脂脱色，并将所得脱色液与3-6倍体积的纯丙酮混合，收集沉淀得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐；

进行树脂脱色采用的脱色树脂可为D301树脂、D750树脂、D730树脂或SD300树脂，进样速度为1.0-4.0ml/min。

10.如权利要求9所述的利用酵母菌发酵生产腺苷蛋氨酸的方法，其特征在于，将所得脱色后的腺苷蛋氨酸硫酸盐于-40℃预冻后进行真空干燥，得到以固体粉末状腺苷蛋氨酸硫酸盐形态存在的所述腺苷蛋氨酸。