[发明专利]抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体。本发明还公开了诊断猪流行性腹泻病毒感染的试剂盒，其包含上述单克隆抗体。本发明还公开了该单克隆抗体的制备方法和应用。本发明抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体，与猪流行性腹泻病毒具有良好的反应性，适用于快速准确地诊断PEDV，同时为监测、预防PEDV提供重要的技术支撑，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体及其应用。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由冠状病毒属的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种急性、高度接触性猪肠道传染病，此病以猪的呕吐、腹泻、脱水和对哺乳仔猪高致死率为主要特征。1978年，该病在比利时与英国被首次报道。随后，在匈牙利、意大利、中国、日本、泰国、美国和韩国等国家也陆续发现该病。自2010年底以来，PEDV变异体给中国养猪行业造成巨大的经济损失。2013年，美国也爆发PEDV变异病毒。近年来，PEDV是引起中国和美国仔猪死亡的一个重要病原体。PEDV基因组全长约为28kb，包含7个开放阅读框能够编码4个主要的结构蛋白：纤突蛋白(spike,S)、包膜蛋白(envelope,E)、膜糖蛋白(membrane,M)、核衣壳蛋白(nucleocapsid,N)和3种非结构蛋白：复制酶1a和1b，ORF3。其中N蛋白在PEDV的结构蛋白中所占的比例较大，具有较强的抗原性，不仅能够诱导宿主T细胞和B细胞免疫反应，而且在病毒感染早期，机体内能够产生较高水平的抗N蛋白抗体(孙东波,冯力,时洪艳,等，2006)。N蛋白为螺旋病毒粒子提供一个结构基础，是一个与基因组相关联的碱性磷蛋白。

猪感染PEDV后，如果仅依据临床症状、病理变化和流行病学很难做出正确的诊断，特别是与传染性胃肠炎(TGE)不易区别，必须依靠实验室技术才能作出正确诊断。目前诊断PEDV感染的方法有间接血凝试验(IHA)、免疫电镜(IEM)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫荧光(IF)、RT-PCR等，其中免疫荧光和酶联免疫吸附试验较为常见(邓祖丽颖，2013；郑逢梅,赵军,霍金耀,等，2013)。但这些现有的诊断技术较为耗时、耗力，无法在临床上广泛应用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体，该单克隆抗体可用于快速准确地诊断猪流行性腹泻病毒(PEDV)。

为了解决上述技术问题，本发明通过如下技术方案实现:

在本发明的一个方面，提供了一种抗猪流行性腹泻病毒N蛋白的单克隆抗体。

优选的，所述猪流行性腹泻病毒N蛋白具有SEQ ID NO.1所示氨基酸序列。

更优选的，所述抗体是由杂交瘤细胞株CCTCC NO.C2014136分泌的单克隆抗体。

在本发明的另一方面，还提供了一种重组载体，其包含编码SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的核苷酸序列。

所述重组载体的空载体包括原核表达载体或真核表达载体。

在本发明中，原核表达载体优选pCold I DNA原核表达载体。

在本发明的另一方面，还提供了一种宿主细胞，其包含上述重组载体。

在本发明的另一方面，还提供了一种重组蛋白，该重组蛋白是由上述重组载体经表达而制得。

在本发明的另一方面，还提供了一种上述单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

构建含猪流行性腹泻病毒N蛋白基因的重组表达载体；

将所述重组表达载体转化入宿主细胞进行诱导表达，得可溶性的猪流行性腹泻病毒重组N蛋白；