[发明专利]一种处理流感病毒收获液的方法

说明书

技术领域

本发明涉及疫苗制备领域，具体地，涉及一种处理流感病毒收获液的方法。

背景技术

流行性感冒(influenza，简称流感)是由甲(A)、乙(B)、丙(C)三型流感病毒引起的急性呼吸道感染疾病，具有传染性强、传播速度快的特点。甲型流感病毒常以流行形式出现，引起世界性流感大流行，它在动物中广泛分布，并能在动物中引起流感流行和动物大量死亡；乙型流感病毒常常引起流感局部暴发；丙型流感病毒主要以散在形式出现，主要侵袭婴幼儿，一般不引起流感流行。流感主要通过空气中的飞沫、人与人之间的接触或与被污染物品的接触传播。接种流感疫苗是预防和控制流感的最有效手段之一，可以减少接种者感染流感的机会或者减轻流感症状。

根据WHO相关指南规定，流感疫苗的生产可使用健康鸡群来源的鸡胚。目前，国内外流感疫苗生产普遍遵循这一原则，基本工艺步骤包括毒种接种鸡胚尿囊腔、培养、病毒收获、纯化、灭活、裂解、再纯化等。但传统的鸡胚培养技术存在收获液成分复杂不易处理问题。收获液中杂质主要有卵清、蛋壳、鸡血细胞、来自蛋壳表面和鸡胚本身可能存在的外源性微生物等，这些杂质会增加后期灭活和纯化工艺的难度，尤其微生物过多，会产生大量细菌内毒素，增加疫苗的副反应，给疫苗的安全性带来风险。中国药典第三部(2010版)中规定收获液中微生物限度应小于10⁵CFU/ml。

为了满足流感疫苗收获液中国家规定的微生物小于10⁵CFU/ml的标准，现有各厂家在处理流感病毒收获液过程中使用了不同的工艺技术，分别采用绢布过滤，20μm-1μm多级滤器过滤，管式离心机分离澄清，0.45μm滤芯过滤，除菌级0.2μm滤芯过滤，或前述两种或两种以上方法的组合。但这些处理流感病毒收获液方法的效果均不理想，主要表现在流感病毒抗原损失较大、收获液微生物限度降低不显著、使用大量滤芯造成成本增加。因此需要开发一种处理流感病毒收获液的新工艺来解决上述问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种处理流感病毒收获液的方法，以解决现有技术在处理后的流感病毒收获液中流感病毒抗原损失较大、收获液中微生物限度降低不显著、且使用大量滤芯造成生产成本增加的诸多问题。

本发明提供的一种处理流感病毒收获液的方法，包括以下步骤：

(1)将流感病毒收获液经碟片离心机离心后，收集澄清液；

(2)澄清液通过预过滤器过滤；

(3)滤液经过减菌滤器过滤；

本发明所述的流感病毒收获液为接种流感病毒后收获的鸡胚尿囊液。所述的流感病毒收获液获得方法是将10²-10⁵EID₅₀/ml的流感病毒接种于9-11日龄鸡胚的尿囊腔中，将接种后鸡胚置于32-36℃孵化器中培养30-90小时，留下活胚，置0-10℃冷胚后，收获的鸡胚尿囊液即为流感病毒收获液。

本发明方法中，步骤(1)碟片离心机转速为4000-10000rpm,排渣时间为30-90min。

优选地，步骤(1)碟片离心机转速为7200rpm,排渣时间为60min。

其中，步骤(1)进料速度控制在2.0～5.0kg/min。进料即将流感病毒收获液投放入碟片离心机。

本发明方法中，步骤(2)的预过滤器孔径≤5μm。

优选地，步骤(2)的预过滤器孔径为1.0μm。

步骤(2)过滤过程中滤器压力≤0.2MPa。优选≤0.1MPa。

本发明方法中，步骤(3)的减菌滤器孔径为0.2-0.45μm。优选0.2μm

其中，步骤(3)过滤过程中滤器压力≤0.2MPa。优选≤0.1MPa。

本发明提供了上述方法在制备流感疫苗中的应用。

本发明的创新之处在于将碟片离心机、预过滤器、减菌滤器的组合应用于流感病毒收获液的处理中。碟片离心机是立式连续流离心机的一种，其转鼓装在立轴上端，通过传动装置由电动机驱动而高速旋转。在转鼓内有一组互相套叠在一起的碟形零件——碟片。碟片与碟片之间留有很小的间隙。料液从位于转鼓中心的进料管进入转鼓。再流过碟片之间的间隙，固体颗粒(或液滴)在离心机作用下沉降到碟片上形成沉渣(或液层)。沉渣沿碟片表面滑动而脱离碟片并积聚在转鼓内直径最大的部位，分离后的液体从出液口排出转鼓。