[发明专利]miRNA标志物hsa-miR-486-5p的应用

说明书

 

技术领域

本发明属于基因工程与生命科学领域，公开了一种miRNA标志物hsa-miR-486-5p的应用。

 

背景技术

尘肺病是由于在职业活动中长期吸入生产性粉尘所引起的以肺组织弥漫性纤维化为主的全身性疾病。当前尘肺病仍是我国影响面最广泛、最严重的职业病，来自全国职业病报告系统数据显示，2012年全国共报告新发职业病24206例尘肺病新病例，其中，煤工尘肺和矽肺分别为12405例和10592例，分别占尘肺病的51.25%和43.76%。 尘肺病报告病例数报占2012年职业病报告总例数的88.28%。尘肺病一旦发生，难以治愈，对健康损害严重，已成为危害我国相关职业劳动者健康和影响社会稳定的主要公共卫生问题之一。目前，尘肺病的诊断主要依赖高仟伏胸片，然而胸部影像学成像受多种因素的影响，目前缺少尘肺病筛检方法和诊断特异性的血清生物标志物，致使尘肺病未能有效监护、诊断及治疗。因此，寻找特异且灵敏的粉尘致肺损伤的血清学指标来辅助早期诊断、早期干预、及时合理治疗亟待解决的重大科学问题。

煤工尘肺（Coal Workers’ PneμMoconiosis, CWP）包括煤肺、矽肺和煤矽肺三种，我国绝大多数煤工尘肺属于煤矽肺，大约占90%。煤工尘肺主要是由于长期吸入生产性矽尘和／或煤尘引起的以肺组织不可逆性进行性纤维化为主的全身性疾病。肺纤维化过程包括肺组织炎性损伤、肺组织结构破坏以及伴有基质细胞聚集的肺组织修复。主要病理特征为成纤维细胞增殖和细胞外基质在肺组织内沉积过多，发病机制尚不完全清楚。大量研究证实肺纤维化的发生发展涉及到多种细胞因子及其相关基因的复杂网络调控，而miRNA参与调控人类约1/3基因的表达，提示miRNA在肺纤维化的发生发展中发挥了重要的调控作用。

MicroRNAs（miRNAs）是一类含有21~22个核苷酸的非编码小RNA，通常通过与靶mRNA 3' 端完全或部分匹配互补结合，导致靶mRNA 降解或抑制其翻译从而调控靶基因的表达。自从在Caenorhabditis elegans中发现第一个miRNA以来，目前已经发现了几千种miRNAs，其中人类miRNAs种类大约有2500种（miRbase v20）。miRNA对多种生理过程包括发育、增殖、分化凋亡和应激反应等重要功能基因的表达起调控作用。近年来，miRNA与疾病的关系已经成为研究的重点和热点，当前研究表明，特异miRNA的表达谱与包括癌症、炎症、感染和自体免疫疾病等各种疾病的发生和发展相关。另外，在多种体内模型中功能miRNA的获得或缺失研究已经进一步证实它们的重要作用。

研究已证实血清中存在miRNAs，且含量丰富、性质稳定、易于定量检测并存在显著的疾病特异性。现有的技术包括定性和定量的检测miRNAs分子技术表明利用血清miRNAs作为分子标志物的方法比传统的特异蛋白分子标记方法将更加有效，为生物标志物开拓了新境界。然而，目前还没有用于煤工尘肺辅助早期诊断的较为稳定的生物标志物报道，若能筛选出煤工尘肺特异或异常表达的血清miRNAs作为生物标志物，并研制相应的辅助早期诊断试剂盒，对我国尘肺诊断现状必将是一次有力的推动。

 

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提出一种miRNA标志物hsa-miR-486-5p的应用。

发明人通过建立小鼠矽肺模型，用Affymetrix miRNA表达谱芯片初步筛选出矽尘处理组与对照组比较差异表达miRNAs，并在两种肺纤维化动物模型肺组织中进行两阶段验证，最后再CWP病例及与其年龄、工龄匹配的健康对照血清中验证，寻找一组与CWP发病高度相关的高特异性和敏感性的miRNAs，并研制出可便于临床应用的CWP辅助诊断试剂盒，为CWP的筛查和早期诊断提供数据支持，为CWP的干预提供理论依据。

技术方案：miRNA标志物hsa-miR-486-5p在制备筛查诊断煤工尘肺症试剂盒中的应用。

一种筛查诊断煤工尘肺症试剂盒，包括miRNA标志物hsa-miR-486-5p。

一种筛查诊断煤工尘肺症试剂盒，包括扩增编码miRNA标志物hsa-miR-486-5p的引物。