[发明专利]一种融合蛋白质、制备方法及其应用

权利要求书

1.一种融合蛋白质的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将完整的靶基因的cDNA片段克隆到融合蛋白的表达载体，cDNA克隆时，在完整基因的cDNA片段前，起始密码子(ATG)之后，加上Xa因子位点异亮氨酸-谷氨酸-甘氨酸-精氨酸(Ile-Glu-Gly-Arg)的脱氧核糖核酸序列；

(2)将步骤(1)得到的含有完整目的基因的亚克隆表达载体，转型或转染到表达宿主细胞内，使之在宿主细胞内表达所需融合蛋白质，通过接种培养，获得含有完整目的基因载体的纯克隆细胞株；

(3)使用步骤(2)含有完整目的基因载体的纯克隆细胞株，进行量化培养，蛋白表达处理，获得量化的，有目的融合蛋白质的宿主细胞；

(4)将步骤(3)得到的宿主细胞进行裂解，获取细胞裂解液，对蛋白质进行纯化，获得分离，纯化的融合蛋白质；

(5)使用因子Xa处理融合蛋白质，可获得纯化的目的基因蛋白质。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白质的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中加上Xa因子位点异亮氨酸-谷氨酸-甘氨酸-精氨酸(Ile-Glu-Gly-Arg)的脱氧核糖核酸序列，可以保证所表达的蛋白质在Xa切割后，获得的目的蛋白质的氨基酸顺序是所需的，完整的。

3.根据权利要求1所述的融合蛋质白的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)和(5)是通过亲和柱来进行蛋白质分离和纯化的。

4.根据权利要求1所述的融合蛋白质的制备方法，其特征在于，所述一种代表性融合蛋白为钙调素融合蛋白，是以钙调素为目的蛋白质的钙调素蛋白和麦芽糖结合蛋白的融合蛋白质。

5.一种权利要求1至4任一项所述的制备方法，制备得到的融合蛋白。

6.一种融合蛋白质的应用，其特征在于，利用分离纯化获得的融合蛋白，分离、纯化和浓缩目的蛋白质，可用于蛋白质的性能分析和应用。

7.根据权利要求6所述的融合蛋白质的应用，其特征在于，利用融合蛋白，富集生物样本中的靶分子，达到分离、纯化、浓缩和提高检测灵敏度的目的。

8.根据权利要求6或7所述的融合蛋白质的应用，其特征在于，所述目的融合蛋白质为麦芽糖结合蛋白-钙调素融合蛋白，可用来结合和浓缩样本中的一种靶分子为热休克蛋白90。