[发明专利]一种泥蚶抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6

说明书

技术领域

本发明属于功能基因筛选技术领域，具体涉及一种泥蚶抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6。

背景技术

抗氧化蛋白Peroxiredoxin是抗氧化物酶系，属抗氧化蛋白超家族，它的蛋白序列和催化活性与其它的抗氧化剂不同。Peroxiredoxin家族有六个成员分别为：Prx I、Prx II、Prx III、Prx IV、Prx V和Prx VI。Prx能够保护基因组免受活性氧的破坏和通过抑制细胞衰老使基因组保持完整从而预防肿瘤的发生。因此Peroxiredoxin为肿瘤的治疗提供了新的方法。植物中对抗氧化蛋白的研究主要集中在植物的生长发育和环境适应中的作用，它既作为抗氧化剂还原多种有害的过氧化物，又参与信号转导调节着细胞氧化还原状态以及抗氧化剂代谢的平衡。在无脊椎动物的研究中用Peroxiredoxin免疫动物后，可以产生相关的保护性，这将有望应用于寄生虫感染的血清学诊断。除此之外，抗氧化蛋白还作用于宿主与寄生虫之间的相互影响中，因此抗氧化蛋白可以作为候选疫苗分子，这将为寄生虫高效疫苗的研究提供新的线索。

近年来由于我国沿海地区人为活动的开展，环境的改变和恶化导致其抗病性状退化，发病死亡率升高，致使泥蚶种群数量急遽下降，产量锐减，经济效益受到严重影响。因此，进一步研究泥蚶免疫机制的机理，对丰富泥蚶基因的研究内容具有理论指导意义，为今后泥蚶的健康养殖提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供一种泥蚶抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6(Prx6)及其应用，从而弥补现有技术的不足。

本发明所筛选获得的抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6，其包含有：

1)氨基酸序列为SEQ ID NO:1的蛋白；

2)在1)中的氨基酸中取代、缺少或添加一个或一个氨基酸，具有与1)中功能的蛋白。

本发明还提供用于编码上述抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6的基因，其一种核苷酸序列为SEQ ID NO:2；

本发明的抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6可用于制备抗氧化剂；其一种应用是作为饲料添加剂。

通过对泥蚶抗氧化蛋白Prx6基因的筛选和克隆，获得Prx6基因的全长序列，并对其进行生物信息学分析，进而探究Prx6基因表达机理和调控机制，丰富泥蚶免疫学和分子遗传学的研究内容。为后续开展功能基因和分子育种的研究，发掘与生长、繁殖、营养代谢、抗病等主要经济性状相关的候选基因提供理论依据。

附图说明

图1：泥蚶Peroxiredoxin-6 cDNA序列及翻译的氨基酸序列图；其中：方框标注字母为对应起始密码子(ATG)和终止密码子(TAA)和多聚尾信号(AATAAA)；

图2：泥蚶Peroxiredoxin-6氨基酸序列对比结果，其中：泥蚶(Tegr)，沙蠋(Arma)，鲑疮痂鱼虱(Lesa)，大西洋鲑(Sasa)，斑点叉尾鱼(Icpu)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进行详细的描述。

一、泥蚶抗氧化蛋白Peroxiredoxin-6(Prx6)的分离

1、本实验所用的泥蚶均购自宁波市场。

2、实验所用引物

本实验所用引物详见表1：

表1：泥蚶Prx6的cDNA克隆及相关实验所用到的引物

3、实验所用试剂

异丙醇、乙醇、Trizol、RNase-Frees水、氯仿、TAE缓冲液、氨苄青霉素、柠檬酸钠、X-gal、IPTG、葡萄糖、SOB、琼脂粉等普通试剂采购自上海生工；普通DNA产物回收试剂盒和琼脂糖凝胶试剂盒采购自天根技术有限公司；Advantage 2 Polymerase试剂盒、SMARTTM RNA cDNA扩增试剂盒采购自Clontech公司；大肠杆菌DH5α、rTag聚合酶、PMD-18载体采购自Takara公司；反转录试剂盒试剂盒采购自Promega公司；SYBR Gree Realtime Master Mix采购自美国Bio-rad生物技术有限公司。

4、泥蚶RNA的提取

Triol法总RNA提取方法如下：

前期准备：超净工作台紫外光杀菌。打开冷冻离心机，泡沫盒取冰块，戴上一次性手套，手套上喷洒75％酒精。

(1)取新鲜泥蚶血液、外套膜、足等组织，将组织剪碎，放到10mL离心管中，加入1mLTrizol裂解液。