[发明专利]一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子标记技术领域，更具体地，涉及一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法。

背景技术

腺病毒因具有感染效率高、宿主范围广、容纳量大、非整合性等特点而成为基因转移中最具前景的基因载体之一，并且被广泛地改造成各种类型的溶瘤性腺病毒，应用于肿瘤基因治疗的研究之中。溶瘤性腺病毒是能特异性感染肿瘤细胞并在肿瘤细胞中大量复制最终裂解肿瘤细胞，释放出来以感染更多肿瘤细胞的一类病毒，同时这些病毒因无法在正常细胞内复制而对正常细胞副作用小。溶瘤性腺病毒所携带的治疗基因，在病毒复制的同时，治疗基因拷贝数也相应增加，这样就使病毒溶瘤效应和基因治疗作用结合起来，即“病毒-基因治疗”，起到治疗的协同效应。“病毒-基因治疗”要想成熟的运用于临床，还要考虑病毒使用的安全性和评价治疗的有效性，即如何监测溶瘤性腺病毒在体内复制和播散情况。

目前常规是通过取活检用免疫组化方法来检测溶瘤性腺病毒在体内复制情况和复制范围，但这种方法存在着明显的缺点：（1）对机体造成损伤，也不能进行重复连续观察。（2）不能方便实时获得病毒在体内的分布和复制的信息。

HSV-1TK是一个被广泛研究的基因。不仅可用来对多种肿瘤的基因治疗。同时HSV-1TK也是应用于分子成像较为成熟的 “标记基因”。HSV-1TK酶的三个常用“标记底物”是IUdR、GCV和FIAU，放射性标记底物可用于非侵入的分子成像。FIAU做为一个潜在的“标记底物”，是因为它是典型的2'-氟代核苷类似物，放射性标记的碘（I）或碳（C）能掺入分子中，可用gamma相机和SPECT成像。已有的研究表明，FIAU经放射性标记后，分子成像的稳定性优于IUdR或GCV。基于此，以HSV-1TK基因做为“标记基因”，FIAU做为“标记底物”来进行体内分子成像。

发明内容

本发明为了克服现有技术的上述不足，提供一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法。所述方法能够实现非侵入和实时监测溶瘤性腺病毒复制、播散、分布情况。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的。

一种监测溶瘤性腺病毒体内复制情况和范围的方法，包括如下步骤：将标记基因HSV-1TK整合到溶瘤性腺病毒的基因组内，得到携带HSV-1TK基因的溶瘤性腺病毒，病毒感染治疗受体，利用对HSV-1TK体内分子成像的方法来间接反映溶瘤性腺病毒在治疗受体内的复制情况和体内分布情况。

优选地，所述体内分子成像的方法为gamma相机成像或SPECT成像。

优选地，所述标记基因HSV-1TK以FIAU为标记底物，且FIAU的集聚水平与HSV-1TK基因表达水平成正比。

用溶瘤性腺病毒携带标记基因HSV-1TK，当溶瘤性腺病毒在体内复制的时候，所携带标记基因拷贝数也相应增加。由于基因拷贝数的增加和病毒的复制情况是成正比的，通过对目的基因分子成像，就能间接监测病毒在活体器官或组织中的位置和剂量，来反映病毒复制和体内播散情况。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明将标记基因HSV-1TK整合到溶瘤性腺病毒的基因组内，得到携带HSV-1TK基因的溶瘤性腺病毒，病毒感染治疗受体，可以利用对HSV-1TK成像的方法来间接反映溶瘤性腺病毒的复制情况和体内分布情况，从而实现非侵入和实时的监测溶瘤性腺病毒在体内复制和分布范围。另外，标记基因HSV-1TK本身也是治疗基因，与溶瘤性腺病毒在肿瘤基因治疗中能起到协同杀伤肿瘤作用。

附图说明

    图1.在NCIH460TK⁺细胞株中，检测 HSV-1TK mRNA表达、前药GCV敏感性和FIAU集聚水平三者间的关系；（A）HSV-1TK mRNA表达与前药GCV敏感性关系；（B）HSV-1TK mRNA表达与FIAU集聚水平的关系；（C）FIAU集聚水平与前药GCV的关系。

    图2.Gamma相机体内成像方法监测HSV-1TK基因的表达，其中，图A中箭头所示为NCIH460TK⁺所成肿瘤，对侧为野生型NCIH460所成肿瘤；图B为静脉注射2-[¹⁴C]FIAU 24小时后gamma相机成像；图C为静脉注射2-[¹⁴C]FIAU 36小时后gamma相机成像。

    图3. 标记基因HSV-1TK表达情况和溶瘤性腺病毒复制情况成线性关系。

具体实施方式