[发明专利]分枝杆菌分型鉴定荧光PCR反应液及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种分枝杆菌分型鉴定荧光PCR反应液及试剂盒。

背景技术

分枝杆菌包括结核分枝杆菌(M.tuberculosis，MTB)、非结核分枝杆菌(Nontuberculous Mycobacteria，NTM)及麻风分枝杆菌。NTM常存在于自然环境中，迄今为止已发现有150余种，其中约1/3与人类疾病有关。

我国历次结核病流行病学资料显示，NTM分离率从1990年的4.9％升至2000年的11.1％，2010年为22.9％，这基本反映出我国NTM病呈明显上升的态势。

临床研究发现，NTM对大多数抗分枝杆菌药物均耐药，因此，NTM病的用药原则与结核病有着明显的不同，而且不同型别NTM病的用药种类和病程也可有所不同，所以NTM的分型鉴定就成了治疗前的一个非常重要的工作。

然而，NTM病的病理所见与结核病很难鉴别，传统临床只能依靠分枝杆菌的生长特性、色素、生长速度、菌落形态及用生化试验等参数作出鉴定，这种方法费时、费力，且没有标准化试剂，缺乏敏感性和特异性，导致很多结果不易判断。高效液相色谱测定分枝菌酸及气相色谱测定脂肪酸均存在菌种鉴定的局限性，受菌株的生长环境、营养状况的影响，并且需要特殊的仪器。

基因检测方法可以检出不同型的NTM，但其中PCR产物直接序列测定和限制性内切酶切图谱操作复杂，且不适合检测混合性感染。普通荧光定量PCR只能区分NTM和MTC(结核分枝杆菌)，而不能对NTM进行分型。基因芯片和反向点杂交法可以对NTM进行分型，但这两种方法均操作较复杂，不适合临床大规模推广使用。

发明内容

本发明的主要目的在于提出一种检测准确、快速、可靠的分枝杆菌分型鉴定荧光PCR反应液及试剂盒。

一种分枝杆菌分型鉴定荧光PCR反应液，其含有扩增引物和分子信标探针；

其中所述分子信标探针包括两端分别带有荧光基团和淬灭基团的12条分枝杆菌的分子信标探针中的至少一种，其序列为：

名称序列对应菌种MSM5’-CCCACAGTTAAGCTGTGAGTTTTCTGTGGG-3’耻垢分枝杆菌MKA5’-GTTGCCCTACGGGTAGCGTGGCAAC-3’堪萨斯分枝杆菌MGO5’-GGAGGCCCTCGGGTGCTGTCCCTCC-3’戈登分枝杆菌MCH5’-CACCAAGCTGTAGTGGTTACTCGCTTGGTG-3’龟分枝杆菌MMA5’-ACGGCACGCTCACAGTTAAGCCGT-3’海分枝杆菌MXE5’-GGAGCACCCGTGGTGGTGTTGTGCTCC-3’蟾蜍分枝杆菌MAC5’-GCGGTTGCGAGCATCTAGATGAGCCGC-3’鸟胞内分枝杆菌MFO5’-CGTGCGTGGTTGCGAGCATCTAGCACG-3’偶发分枝杆菌MSC5’-CTCGGCTCGTTCTGAGTGGTGTCCCGAG-3’瘰疬分枝杆菌MAB5’-CCCAGTCGAATGAACTAGGGAACACTGGG-3’脓肿分枝杆菌MTB5’-CCTGGCAACACTCGGACTTGTTCCAGG-3’结核分枝杆菌MPH5’-GGGGGTGGTGTCCCGGTTGCCCCC-3’草分枝杆菌