[发明专利]胸腹水恶性细胞的包埋方法

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，涉及一种胸腹水恶性细胞的包埋方法。

背景技术

诊断恶性胸腹腔腔积液的金标准是在胸腹水中找到癌细胞。

胸腹水脱落细胞诊断因具有快速、简便以及患者痛苦少等优点,在临床上已被广泛应用,并成为诊断疾病的重要手段之一，尤其对良恶性疾病的鉴别起关键性作用，可以为临床提供非常有价值的，因此胸腹水脱落细胞学检查已经成为早期筛查恶性肿瘤的重要手段。

但目前往往胸腹水诊断阳性率很低。原因之一就是检测方法的选择。目前许多大型医院病理科常用的脱落细胞学检查方法依然是细胞离心沉渣后直接涂片法。但是这种方法收集到的细胞数量少，常需多次送检才能得到满意的结果；制作的涂片质量受标本的新鲜程度、血细胞含量、细胞分布情况、涂片厚薄及染色等因素的影响，使得漏诊率和误诊率较高，恶性肿瘤细胞检出率极低。

但是由于送检脱落细胞学的取材方便、简单，快捷，临床医生常常选择此种辅助检查方法，正是因为这样，造成了临床与病理科之间因肿瘤细胞检出率过低而带来的诊疗方面的困惑，临床医生强烈要求寻找新的方法和技术提高脱落细胞的阳性检出率。

近年来，随着液基薄层制片技术的普及，大大提高了标本涂片质量，其利用流体动力学原理可制备厚薄均匀的涂片，并可减少涂片上血细胞、粘液等因素的影响。但其受标本及涂片数量的限制，不能进一步进行后续的分子及基因等诊断。特别是对细胞形态不典型的间皮细胞、转移癌细胞的鉴别等，仅仅用涂片法是难以胜任的，常需做免疫细胞化学染色检查才能确诊。

对此，病理科在长期的工作中提出来琼脂细胞包埋和凝血酶细胞包埋方法，极大的提高了脱落细胞阳性检出率，并可进一步进行后续的分子、基因及免疫组化等诊断。

因此，寻找一种新的细胞包埋技术是亟待解决的问题。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种胸腹水恶性细胞的包埋方法，可以极大地提高脱落细胞阳性检出率，可进一步进行后续的分子、基因及免疫组化等诊断。

为实现上述目的，本发明提供了一种胸腹水恶性细胞的包埋方法，其包括步骤首先将胸腹水分别置于若干50ml离心管内，并将分析纯乙醇分别加入离心管中，混匀、静置2-4小时，得到沉淀物；将沉淀物中的水份吸取，将其采用固定模具包裹得到标本并置于取材盒中；将得到的标本进行脱水，脱水剂为乙醇；将脱水后的标本透明,透明剂为二甲苯；将透明处理后的标本在70℃恒温箱内浸蜡,包埋剂是石蜡；将浸蜡处理后的标本在包埋工作站中采用石蜡包埋，将标本和石蜡倒入包埋盒中，待包埋盒表面的石蜡凝固后，将包埋盒置于冷水中使得石蜡快速凝固，最后从包埋盒中取出蜡块并保存。

通过以上技术方案，本发明的有益效果如下：

a.取材方便、简单；

b.收集到的有核细胞多，切片质量好，细胞结构清晰，大大提高了阳性检出率，特别是对细胞量较少的标本，意义更大；

c.制成的蛋白质蜡块可以长期保存，可以连续切片，克服了以往涂片法标本有限的缺点；

d.本发明主要是利用改变电解质平衡进行自体蛋白质骨架结构的原理，没有加入任何外来物质，利于进一步的分子诊断及基因检测等，同时克服了琼脂和凝血酶等细胞包埋技术因加入了外源性物质而不利于进一步的分子诊断及基因检测等缺点。

附图说明

图1为采用本方法的胸腹水自体蛋白质骨架包埋切片的示意图；

具体实施方式

下面结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步描述，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

如图1所示，在血性背景下，红细胞裂解破碎，肿瘤细胞密集，分布均匀，瘤细胞胞膜结构清晰，核染色质嗜碱性，粗颗粒，核仁清楚，并可见病理性核分裂象。该片可直接诊断为恶性肿瘤，但为何种肿瘤需做免疫组织化学染色进一步确认。

首先将200ml胸腹水置于8个50ml离心管内，并将分析纯的乙醇分别加入离心管中，混匀、静置2-4小时，得到沉淀物；若为血性胸腹水，需要在其中加入等量的50％乙醇混匀。在加入分析纯的乙醇放置一段时间后，胸腹水开始出现沉淀，原因是胸腹水是等电子胶体，加入的乙醇是正电子液体，它会与胸腹水中负电子的细胞任意比结合，从而改变胸腹水的电解质平衡，胸腹水中有用的蛋白成份将会聚集，形成豆腐渣样沉淀物；