[发明专利]基于上转换荧光标记和磁分离技术的氯霉素检测新方法

权利要求书

1.基于上转换荧光标记和磁分离技术的氯霉素检测新方法，其特征在于包括如下步骤：

一步法制备氨基修饰的纳米材料Fe3O4：分别向圆底烧瓶中加入6.5g1,6-己二胺，30mL乙二醇，1.0g六水合三氯化铁和2.0g无水醋酸钠，在油浴锅中50℃加热条件下搅拌形成均匀的胶体溶液；

将所得溶液转移到100mL带聚四氟乙烯内衬的反应釜中，198℃条件下反应6h；

反应结束后让反应釜自然冷却至室温，弃釜内上层液体，底部的黑色固体用去离子水冲洗至烧杯中，超声分散，然后磁分离收集；

按照这个方式水洗2次，乙醇洗2次，所得黑色固体在50℃条件下干燥；

得到的即为氨基化Fe3O4磁性纳米颗粒固体粉末，储存备用；

分别将Y(NO3)3·6H2O，Yb(NO3)3·6H2O，Er(NO3)3·6H2O配置成0.5M，0.2M，0.2M的浓度保存备用；

称取1.2gNaOH溶于9mL水中，然后加入10mL乙醇，20mL油酸，搅拌形成均质透明溶液，在磁力搅拌下向体系中面加入摩尔总量为0.6mmol的稀土元素（摩尔比Y:Yb:Er=78:20:2），随后向体系中逐滴加入NaF溶液（1.0M，4mL），搅拌约15min，转移到50mL容量带聚四氟乙烯内衬的反应釜中，180℃的烘箱中反应8h；

称量1.6g表面活性剂CO-520溶于20mL环己烷，搅拌一段时间后在磁力搅拌下加入已溶于环己烷（2mL）中的上装换纳米材料，继续搅拌形成透明的反相微乳体系；

然后向体系中加入200μL的100NH3·H2O，搅拌一段时间后加入100μL的TEOS，20μL的APTES，在室温下搅拌24h；

将5mg的磁珠分散于5mL的10mMPBS中，超声分散，然后加入1.25mL25%的戊二醛溶液，将混合溶液在室温下孵育缓慢振荡2h；

磁分离得到的磁性纳米材料用PBS清洗三次；

再取1mL（1.0mg/mL的纳米材料）向里面加入100μL亲和素（1.0mg/mL），在室温下孵育缓慢振动12h；

称取10mg上转换纳米材料分散于5mL10mM的PBS（pH7.4）中，超声15min让其充分分散，然后加入1.25mL25%的戊二醛溶液，将混合溶液在室温下摇床中孵育缓慢振荡2h；

通过离心分离得到上转换纳米材料，用10mMPBS清洗三次；

将得到的纳米材料重置于5mL10mMPBS中，取1mL（2.0mg/mL的纳米材料）加入30μL氨基修饰的氯霉素适配子互补链（10μM），在室温下孵育缓慢振动12h；

反应结束之后离心，收集上清溶液，得到的固体用10mMPBS清洗，然后将偶联好的材料溶于1mL的STE缓冲液中，4℃条件下保存备用。