[发明专利]克伦特罗适配体与检测克伦特罗的适配体电化学生物传感器

说明书

技术领域

本发明属于检测技术领域，涉及一种克伦特罗适配体以及检测克伦特罗的适配体电化学生物传感器，以及该传感器的制备方法与检测方法。

背景技术

克伦特罗(Clenbuterol,CLB)，化学命名为Α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇盐酸盐，分子量为277.19，分子式C₁₂H₁₈Cl₂N2O，是一种人工合成的化学物质，化学结构式如下：

克伦特罗理化性质稳定，在较高温度下不易分解，动物摄入后主要以原药形式残留在肌肉组织和内脏器官中。残留在畜禽产品中的克伦特罗，通过食物链在人体内富集。研究表明，长期食用残留克伦特罗的食品后，会出现头痛、胸闷、心悸、肌肉震颤、四肢麻木等不良反应，严重者甚至危及生命。中华人民共和国农业部第235号公告明确规定克伦特罗及其盐、酯在动物性食品中不得检出。

目前常用的克伦特罗残留检测方法有高效液相色谱法，液-质联用法，气-质联用法，酶联免疫法，电化学免疫传感器等。尽管这些方法有很高的选择性和敏感性，但需要昂贵的仪器或者长时间的样品预处理以及复杂的测试流程。因此，建立一种快速、灵敏、低成本的克伦特罗检测技术具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种可用于克伦特罗含量快速检测的生物传感器及其组装方法。该生物传感器灵敏度更高，响应时间更快，并且可快速用于克伦特罗检测。

本发明的第一个目的是提供一种克伦特罗适配体。

本发明所述的克伦特罗适配体为含有GGATATTGG序列、长度为13-18个碱基的单链DNA探针，且3’端修饰了3’-NH₂-(CH₂)₇-。

本发明的第二个目的是提供一种检测克伦特罗的适配体电化学生物传感器。

本发明所述的检测克伦特罗的适配体电化学生物传感器，含有本发明所述的克伦特罗适配体。

本发明的第三个目的是提供一种适配体电化学生物传感器的制备方法。

本发明所述的适配体电化学生物传感器的制备方法，包括以下步骤：

(1)裸金电极表面的抛光及活化处理：将裸金电极用氧化铝粉末打磨，用超纯水超声清洗去除氧化铝粉末，将清洗好的裸金电极浸入新鲜配制的热的Piranha溶液于20-25℃下活化10分钟，得到活化的裸金电极；

(2)活化电极的适配体修饰：合成如本发明所述的适配体，配制100μmol/L的适配体溶液，加入到NaCl溶液中配制成2μmol/L适配体组装液；将步骤(1)所得的活化的裸金电极浸入适配体组装液中，4℃下组装24小时，得到所述的适配体电化学生物传感器。

本发明的第四个目的是提供一种本发明所述的适配体电化学生物传感器的用途，即将本发明所述的适配体电化学生物传感器用于克伦特罗的检测。

本发明的第五个目的是提供一种检测克伦特罗的方法，该方法是基于本发明所述的适配体电化学生物传感器的检测方法。

本发明所述的适配体电化学生物传感器的检测克伦特罗的方法，包括以下步骤：

(1)对克伦特罗标准溶液进行检测，建立标准曲线：

将所述的适配体电化学生物传感器作为工作电极，Ag/AgCl(饱和KCl)电极作为参比电极，铂丝电极作为对电极；

将所述的适配体电化学生物传感器用超纯水冲洗，去除未结合的适配体，然后置于浓度为5mmol/L的K₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]为1：1的含0.1mol/L KCl的电解液中，进行交流阻抗分析，初始电位为0.22V，频率为0.1-1.0×10⁵Hz，得到适配体电化学生物传感器的交流阻抗图谱及其阻抗值Ret0；