[发明专利]一种当归细胞超低温保存及植株再生的方法有效
| 申请号： | 201410369174.5 | 申请日： | 2014-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN104126570A | 公开（公告）日： | 2014-11-05 |
| 发明（设计）人： | 晋玲;张延红;李应东;姬菊梅 | 申请（专利权）人： | 甘肃中医学院 |
| 主分类号： | A01N3/00 | 分类号： | A01N3/00;A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京中恒高博知识产权代理有限公司 11249 | 代理人： | 高松 |
| 地址： | 730000 甘*** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 当归 细胞 超低温 保存 植株 再生 方法 | ||
1.一种当归细胞超低温保存方法，其步骤如下：
（1）将生长旺盛的当归悬浮培养细胞装载处理；
（2）将装载处理后的当归悬浮培养细胞用玻璃化溶液脱水处理；
（3）将脱水处理后的当归悬浮培养细胞迅速投入液氮中进行超低温保存；
（4）当需要使用悬浮细胞时，从液氮中取出，解冻，用卸载液卸载，卸载一次，卸载20min，所述卸载液的配方为：每升1/2MS培养液附加1.2mol蔗糖；
（5）恢复培养：吸干卸载液，以0.9-1.1cm大小的细胞团块接种于恢复生长培养基中恢复生长，培养温度23℃，光强2000lx、光照时间12h/d。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述生长旺盛的当归悬浮培养细胞为继代培养15-30d的细胞。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述生长旺盛的当归悬浮培养细胞为继代培养15d的细胞。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述装载处理为在25℃装载处理10min，装载液按每升计含0.4mol蔗糖和1mol甘油的混合溶液。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述玻璃化溶液的配方为按每升计含：甘油30g+乙二醇15g+二甲基亚砜15ml+蔗糖13.7g。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述脱水处理为在0℃脱水处理5-40min。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述脱水处理为在0℃脱水处理5min。
8.一种超低温保存后的当归细胞的植株再生方法，其步骤如下：
（1）将解冻并卸载后的悬浮细胞接种到固体培养基上光照培养；所述固体培养基的配方为1/2MS+2.0mg/L IBA+3wt%蔗糖+0.7wt%琼脂；
（2）之后转至成苗培养基中继续培养，培养条件为：光照强度1500LX，光照时间14h/d，培养温度20℃。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的光照培养的条件为培养温度23℃，光强2000lx、光照时间12h/d。
10.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：步骤（2）中所述成苗培养基的配方为：MS+0.5mg/L BA+0.1mg/L NAA+3wt%蔗糖+0.7wt%琼脂。
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