[发明专利]基于软骨内成骨体系的组织工程骨及其构建方法

权利要求书

1.基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，将间充质干细胞种植于多孔骨支架材料上构建组织工程复合体，再在体外对其进行成软骨分化诱导培养2周，继而进行成肥大化软骨分化诱导培养2周，即得基于软骨内成骨体系的组织工程骨。

2.如权利要求1所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞、外周血间充质干细胞、脐血间充质干细胞、脂肪间充质干细胞或脐带间充质干细胞。

3.如权利要求2所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，所述间充质干细胞为骨髓间充质干细胞。

4.如权利要求1所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，所述多孔骨支架材料为脱细胞骨基质或脱钙骨基质。

5.如权利要求4所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，所述多孔骨支架材料为脱钙骨基质。

6.如权利要求1所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，所述成软骨分化诱导培养采用完全软骨诱导培养基，所述完全软骨诱导培养基为DMEM低糖培养基中添加10ng/mL TGF-β3，1wt％ITS+premix，100mg/mL链霉素、100U/mL青霉素、50μg/mL维生素C、40μg/mL脯氨酸和100nM地塞米松；所述成肥大化软骨分化诱导培养采用肥大化软骨诱导完全培养基，所述肥大化软骨诱导完全培养基为DMEM低糖培养基中添加1wt％ITS+premix、100mg/mL链霉素、100U/mL青霉素、50μg/mL维生素C、40μg/mL脯氨酸、1nM地塞米松和20-100ng/mL的三碘甲状腺原氨酸。

7.如权利要求1至6任一项所述的基于软骨内成骨体系的组织工程骨的构建方法，其特征在于，取脱钙骨基质支架材料，用DMEM培养基浸泡48小时，调节pH值为7.2；取第二代处于指数增长期的骨髓间充质干细胞，用PBS洗涤后，用0.1wt％I型胶原酶溶液孵育1小时，再加入含0.25wt％胰酶与0.02wt％EDTA的溶液消化3～5分钟，用含10wt％胎牛血清的DMEM培养基洗涤并重悬后，接种至前述处理后的脱钙骨基质支架材料上，使细胞悬液刚好浸润支架材料且不溢出支架材料之外；3小时后在无菌操作条件下将脱钙骨基质支架材料的底面翻转变成顶面，同前述方法接种细胞悬液；3小时后加入含10wt％胎牛血清的DMEM培养基至刚好没过脱钙骨基质支架材料的顶面，再在37℃、5％CO₂条件下培养；24小时后，在体外对其进行成软骨分化诱导培养2周，继而进行成肥大化软骨分化诱导培养2周，即得基于软骨内成骨体系的组织工程骨。

8.采用权利要求1至7任一项所述方法构建的基于软骨内成骨体系的组织工程骨。