[发明专利]斜带石斑鱼orexin-A在调控石斑鱼糖代谢中的应用

说明书

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及斜带石斑鱼orexin-A在调控石斑鱼糖代谢中的应用。具体应用为将石斑鱼orexin-A用于制备鱼苗苗种促生长剂或饲料添加剂。

背景技术

斜带石斑鱼orexin-A （又称为食欲肽）是由43个氨基酸组成的蛋白质。Orexin是1998年在哺乳动物中发现的新型下丘脑神经肽，分为orexin-A和orexin-B两种，是来源于同一个orexin前体信使RNA经过不同剪接、翻译后的产物。斜带石斑鱼Orexin-A含有一对二硫键，由第7位与第14位的半胱氨酸构成，蛋白大小约为4.7Kda，其序列与结构与哺乳动物orexin-A类似，哺乳动物orexin-A由33个氨基酸及两对链内二硫键构成，蛋白大小约为3.6kda。近年来，鱼类的orexin-A相继被克隆出来，其中包括斜带石斑鱼、鳟鱼、鳕鱼、罗非鱼、青鳉及斑马鱼等，在基因序列与氨基酸序列的同源性上，斜带石斑鱼orexin-A与其他的鱼类的同源性高于哺乳动物，表现出在鱼类中较高的保守性。

目前，对于鱼类orexin-A功能及应用的研究很少，对于哺乳动物及鱼类中的orexin-A研究主要集中在orexin-A对摄食、体重的调控及睡眠觉醒的调控方面，哺乳动物中近年来已经陆续有研究表明orexin-A可以调控机体代谢，而在鱼类研究中针对orexin-A对于糖代谢调控方面的研究则未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是为了克服现有技术中缺乏有效促进石斑鱼苗种生长的饵料添加剂的缺陷，提供斜带石斑鱼orexin-A基因在调控石斑鱼糖代谢中的应用。

本发明的另一个目的是提供斜带石斑鱼orexin-A蛋白在制备石斑鱼鱼苗苗种促生长剂或饲料添加剂中的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

斜带石斑鱼orexin-A基因在调控石斑鱼糖代谢中的应用。本发明通过研究发现，用人工合成超纯级别重组斜带石斑鱼orexin-A进行腹腔注射斜带石斑鱼，结果展示，重组斜带石斑鱼orexin-A以葡萄糖依赖性刺激石斑鱼的糖代谢。

本发明用于表达斜带石斑鱼orexin-A的基因片段是以斜带石斑鱼下丘脑总RNA反转录得到的cDNA为模板，经PCR方法扩增而得到的，它来源于斜带石斑鱼下丘脑cDNA上的前体orexin-A片段。按照上述的斜带石斑鱼orexin-A重组蛋白基因序列，它正好是斜带石斑鱼orexin-A前体基因139bp至267bp（相当于1位至43位氨基酸）的片段，其核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列如SEQ ID NO：1~2所示。

本发明通过研究发现：斜带石斑鱼orexin-A基因可以以葡萄糖依赖的特性刺激上调肝脏或肌肉中葡萄糖转运蛋白glut-1或glut-4的表达量。所以，本发明还保护斜带石斑鱼orexin-A基因在上调肝脏或肌肉中葡萄糖转运蛋白glut-1或glut-4表达量中的应用。

本发明提供斜带石斑鱼orexin-A蛋白在制备石斑鱼鱼苗苗种促生长剂或饲料添加剂中的应用。本发明将高效表达并进行粗提纯的重组斜带石斑鱼orexin-A蛋白作为饲料添加剂投喂斜带石斑鱼鱼苗，实验结果展示：饲料中添加重组斜带石斑鱼orexin-A蛋白能够显著性的促进石斑鱼鱼苗的生长。

石斑鱼是海洋珊瑚礁鱼类,属鮨科(Serranidae)，石斑鱼属(Epinephelus)，有30多种。石斑鱼是一种名贵的海水鱼类，具有极高的经济价值和营养价值。石斑鱼的苗种培育是养殖生产持续发展的关键，但目前在石斑鱼人工养殖中还没有一种能有效促进其苗种生长的饵料添加剂。

一种石斑鱼种苗促生长剂或饲料添加剂，所述促生长剂或饲料添加剂中含有有效剂量的重组斜带石斑鱼orexin-A蛋白。   

本发明的有益效果是：

本发明通过研究发现orexin-A基因对石斑鱼糖代谢具有调控功能，具体为斜带石斑鱼orexin-A基因可以以葡萄糖依赖的特性刺激上调肝脏或肌肉中葡萄糖转运蛋白glut-1或glut-4的表达量。所以，将orexin-A蛋白作为良好的添加剂加入饲料中，显著性的促进石斑鱼鱼苗的生长。

附图说明

    图1.以斜带石斑鱼下丘脑总RNA反转录得到的cDNA为模板的orexin-A基因中间片段PCR扩增产物的凝胶电泳分析图，其中：M. 分子量标准；1. PCR扩增产物。