[发明专利]一种制备利西拉来的方法

权利要求书

1.一种制备利西拉来的方法，提供了一种纯度高，适合规模化生产的利西拉来的制备工艺，此工艺既能有效控制杂质Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来的含量又不影响利西拉来的收率。

2.其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤1，通过液相合成片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH；

步骤2，采用固相合成法，以氨基树脂为起始树脂，按照利西拉来主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中32、33、34、35氨基酸偶联采用片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH偶联；

步骤3，肽树脂裂解、纯化、脱盐、冻干后可以得到利西拉来，其多肽杂质Di-Ser³³-利西拉来和Di-Ala³⁵-利西拉来含量都小于0.1%。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤1所述的片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH的液相合成步骤为：1）Fmoc-Ser(tBu)-OH、HOSu和DCC偶联得到Fmoc-Ser(tBu)-OSu，然后Fmoc-Ser(tBu)-OSu和H-Ser(tBu)-OH反应得到二肽片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH；2）Boc-Gly-OH、HOSu和DCC偶联得到Boc-Gly-OSu，然后Boc-Gly-OSu和H-Ala-OH反应得到Boc-Gly-Ala-OH，在体积比为1：1的TFA和DCM的混合溶液下去Boc保护基，得到H-Gly-Ala-OH；3）Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OH、HOSu和DCC偶联得到Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OSu，然后Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-OSu和H-Gly-Ala-OH反应得到四肽片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤2所述的固相合成方法，1）采用0.10~0.40mmol/g 的氨基树脂为起始树脂；2）采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3）在偶联剂系统的存在下，氨基树脂和Fmoc-Lys(Boc)-OH偶联得到Fmoc-Lys(Boc)-氨基树脂；4）重复步骤2）、3），按照利西拉来主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中32、33、34、35氨基酸偶联采用片段Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-OH偶联。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是：

所述氨基树脂选自Rink Amide AM Resin、Rink Amide MBHA Resin 树脂，优选Rink Amide MBHA Resin树脂；其中所述氨基树脂的替代度为0.10~0.40mmol/g，优选为0.15~0.35mmol/g。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征是：

所述活化剂系统由DIC、HOBt和DMAP组成；所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或他们之间的组合。