[发明专利]五氯硝基苯胶体金试纸条的制备及使用方法

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测领域，具体涉及食品中五氯硝基苯药物残留的一种快速胶体金试纸条的制备及使用方法。

背景技术

五氯硝基苯又名土粒散，不溶于水，溶于有机溶剂，化学性质稳定，不易挥发、氧化和分解，也不易受阳光和酸碱的影啊，但在高温干燥的条件下会爆炸分解，降低药效。对人、畜、鱼低毒，在土壤残效期长。

五氯硝基苯食入过多可能损害心血管系统、中枢神经系统、肝和肾。小白鼠急性中毒时，出现呼吸加快、发绀、颤抖、痉挛性抽搐、共济失调，甚至死亡。慢性作用下，初期红细胞数和血红蛋白含量增加，随后抑制造血功能，衰竭、抽搐，部分动物可致死。在食品中，五氯硝基苯的检测方法气象色谱法，由于以上分析法样品前处理比较复杂，操作时需专门的技术人员、检测费用昂贵，不利于推广应用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种特异性强，灵敏度高，且操作简单方便，对样品经过简单处理即可检测的五氯硝基苯快速试纸半定量检测方法。

本发明的目的可通过以下技术方案来实现

五氯硝基苯胶体金试纸条检测方法其技术要点是：试纸的背衬上依次贴有样品垫和金标垫和硝酸纤维素膜和吸水吸水纸，金标垫上被标记的物质为第二种属动物蛋白与五氯硝基苯检测用抗原的混合物或第二种属动物蛋白与五氯硝基苯抗体的混合物；硝酸纤维素膜上包被有五氯硝基苯抗体1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的IgG1条作为参考线或包被有五氯硝基苯检测用抗原1条作为检测线，同时还包被有抗第二种属动物蛋白的工IgG1条作为参考线。在试纸制备时通过调节检测线和参考线包被物的浓度，控制检测时检测线和参考线的显色深浅，并将其显色深浅与标准物质浓度对应起来，达到半定量检测。

所述的检测用抗原是指五氯硝基苯与载体物质明胶形成的偶合物，免疫用抗原是指五氯硝基苯与载体物质匙孔血蓝蛋白（KLH）形成的偶合物。

所述的载体物质也可以选用其他大分子物质，如：脂蛋白、多聚氨基酸、葡聚糖、卵清白蛋白等，但要求检测用抗原与免疫用抗原的载体无交叉免疫反应。

所述的第二种属动物蛋白指非抗体来源属动物的蛋白，例如，抗体为兔源性，则第二种属动物蛋白可以是卵清白蛋白、猪血清白蛋白等鸡、鸭或其他非兔源性动物蛋白。

本发明所描述的试纸的各部分处理与功能如下：

背衬：为一面涂有不干胶的不吸水的韧性材料，如PVC板，起固定支持试纸其他组成部分的作用。

样品垫制备：将滤纸或玻璃纤维纸浸入pH7.0-8.4的PBS中约莫2min，取出，80℃烘干或其他方式干燥，即作为样品垫，检测时起吸收样品溶液的作用，便于样品溶液向上移动。

金标垫的制备：该部分起固定胶体金标记的抗原或抗体的作用。

制备步骤包括胶体金溶液的制备、胶体金标记五氯硝基苯抗原或五氯硝基苯抗体。

（1）胶体金溶液的制备：将氯金酸（HAuCl₄）用超纯水配制成1%的母液，取1mL的母液，用超纯水定容至100mL，配成0.01%的溶液，加热至沸腾，加入1–5mL1%的柠檬酸三钠水溶液，继续加热至出现透明的橙红色为止，即为胶体金溶液。

（2）胶体金标记五氯硝基苯抗原：将五氯硝基苯检测用抗原和第二种属动物蛋白分别用PBS（0.01mo1/L，pH7.0-7.5）溶解稀释至2-4mg/mL，每100mL胶体金溶液加入1-3mL的2-4mg/mL的检测用抗原1-1.5mL2-4mg/mL第二种属动物蛋白震荡2min，用0.2mol/L的K₂CO₃，调节pH至8.4，震荡5min加入11%PEG-100002mL，震荡5min，6000-13000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）复溶，以8000-15000r/min离心15min，除去上清，将沉淀用PBS（0.0lmol/L，pH7.0-7.5）释500-2000倍产物作为金标记五氯硝基苯抗原。