[发明专利]一种检测氯丙嗪的化学发光酶联免疫分析法

说明书

技术领域

本发明涉及一种酶联免疫检测试剂盒，尤其涉及一种氯丙嗪的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

背景技术

氯丙嗪属于吩噻嗪类代谢物，这种药物主要在肝脏代谢，易产生药物残留，残留的氯丙嗪和部分具有原药活性的代谢物能引起白细胞减少和粒细胞缺乏症，从而引起人体肝脏、肾脏的病变，还会引起眼部的并发症等。有某些国家和地区的饲养者在食用性动物喂养中添加氯丙嗪，导致相关动物性食品中有氯丙嗪的残留，因此定期对氯丙嗪残留进行检测成为许多国家的监控的必要手段。

目前，检测氯丙嗪的方法主要有：微生物法、放射免疫法，高效液相色谱法(HPLC)、色/质联用分析法(LC-MS)、液/质联用分析法(LC-MS/MS)。微生物法的缺陷是：费时而且缺乏特异性。薄层色谱法的缺陷是：操作过程复杂，时间长；操作人员需要经过专业培训；影响分析的干扰因素较多，结果重复性差。放射免疫法，高效液相色谱法、色/质连用分析法、液/质联用分析法这些理化方法的缺陷是仪器设备昂贵，样品前处理复杂，费时，费力，不易普及，检测费用高，特别是放射免疫法还需要配备放射源，有一定危险性。鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测氯丙嗪的方法具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种氯丙嗪的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

本发明所述氯丙嗪的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的氯丙嗪系列标准溶液、酶标羊抗兔抗体、氯丙嗪抗体、发光溶液、洗涤溶液、包被溶液及封闭溶液；其特征在于：

所述酶标板的各孔包被有以氯丙嗪与卵清蛋白偶合制成的包被抗原，其中包被抗原浓度优选10μg/mL。

所述卵清蛋白的分子量范围优选6.7KDa~6.8KDa。

所述氯丙嗪系列标准溶液分别是0ng/mL，0.1ng/mL，0.3ng/mL，0.9ng/mL，2.7ng/mL和8.1ng/mL所述酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，其工作浓度优选为1:1000。

所述氯丙嗪抗体是由氯丙嗪与分子量范围是6.7KDa~6.8KDa的牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的多克隆抗体，其工作浓度优选为1:1000。

所述发光液是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(体积比)H₂O₂的混合液。所述鲁米诺为发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。

所述洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液。

所述包被溶液是每升水中含1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠的溶液，pH为9.5。

所述封闭溶液是每升洗涤溶液中含10g卵清蛋白(OVA，ovalbumin，也称鸡卵清白蛋白或鸡卵白蛋白，由386aa组成，分子量约43Kd)且加入重量分数0.5％NaN₃的溶液。

本发明试剂盒最大检测范围为0.1ng/mL~8.1ng/mL。

本发明试剂盒中涉及的氯丙嗪标准溶液、酶标羊抗兔抗体溶液、氯丙嗪抗体溶液、发光溶液及洗涤溶液及其配方对本发明试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：

1、氯丙嗪标准溶液：以常规方法配制浓度分别为0ng/mL，0.1ng/mL，0.3ng/mL，0.9ng/mL，2、7ng/mL和8.1ng/mL的氯丙嗪标准溶液；

2、酶标羊抗兔抗体溶液：酶标羊抗兔抗体为辣根过氧化酶-羊抗兔IgG原液，使用时用洗涤溶液配制成1:1000的工作浓度；

3、氯丙嗪抗体溶液：氯丙嗪抗体是用人工免疫抗原免疫动物制得的多克隆抗体，将所得氯丙嗪抗体用洗涤溶液稀释成1:1000的工作浓度；

4、发光溶液：是0.01M鲁米诺与0.001M对甲苯酚的三(羟甲基)氨基甲烷溶液(pH＝8.8)和3/10000(体积比)H₂O₂的混合液；

5、洗涤溶液：指含有体积分数0.05％吐温-20的pH7.5、0.1mol/L磷酸盐缓冲液；

6、包被溶液：1.59g碳酸钠和2.53g碳酸氢钠溶于1L水中，调节pH为9.5；

7、封闭溶液配制：10gOVA溶于1L洗涤溶液中，再加入重量比为0.05％的NaN₃。

本发明所述酶标板的制备：