[发明专利]恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法

说明书

技术领域

本发明涉及化学发光酶联免疫检测技术领域，特别涉及一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒及使用方法。

背景技术

诺沙星（Enrofloxacin，简称EF）是第一个畜禽专用的氟喹诺酮类药物，1987年由德国拜耳公司首先研制成功。恩诺沙星化学名为1-环丙基-6-氟-4-氧代-1，4-2氢-7-(4-乙基-哌嗪基)-3-喹啉羧基，易溶于碱性溶液，在水、甲醇中微溶，乙醇中不溶。其结构式见式1.2。

                                                

式1.2 恩诺沙星分子结构式

    恩诺沙星属于抗生素类药物，但其作用机理与以往的抗菌药和抗生素不同。恩诺沙星直接作用于细菌核，破坏细菌的代谢和增殖，抗菌作用是磺胺类药物的近千倍。因其抗菌谱广、抗菌作用强、高效低毒、价格低廉，现已成为畜禽业和水产养殖业中最重要的抗菌类药物之一。

一般认为恩诺沙星不滞留于动物组织，但大剂量应用时有一定的蓄积性。恩诺沙星可引起神经中毒、肾功能损伤、过敏反应、幼畜关节炎等毒副作用。近年来关于恩诺沙星在兽医及人体临床应用上的不良反应和耐药性报道越来越多。恩诺沙星在动物性食品中的残留直接威胁到人类健康，因此必须十分重视恩诺沙星在动物性食品中的残留及耐药性问题。

为了监控恩诺沙星在动物性食品中的残留，各国陆续制定了恩诺沙星等药物在牛、猪、禽的最高残留限量，欧盟规定：恩诺沙星和环丙沙星量之和在动物鸡肉、肝脏和肾脏中最大药物残留为30 μg/kg（NO508/1999）。我国农业部兽药残留指定动物性食品中恩诺沙星和环丙沙星量最高残留量为100～300 μg/kg（农业部第235号公告，2002）。2007年5月，日本厚生劳动省通知我驻日使馆，自5月30日起，将鱼贝类恩诺沙星残留限量标准由100 μg/kg调整为10 μg/kg。2012年3月，我国台湾地区将动物性食品类恩诺沙星残留限量标准调整为10 μg/kg。

目前恩诺沙星残留引起了世界上许多国家和国际组织的高度重视，因此建立一种高度灵敏、低检测限的检测方法具有重要意义。

恩诺沙星残留检测方法通常采用微生物法、色谱法、毛细管电泳和免疫分析法等。微生物检测法不需要复杂的提取和样品准备过程，虽能检测浓度较高的氟喹诺酮类药物残留，但微生物法的检出限通常高于所规定的最高残留限量，且易出现假阴性。色谱法灵敏度高，检出限低，精密度好，但是由于这类方法前处理步骤比较繁琐、对仪器设备和人员操作技能的要求较高，尚不适合于大量样本的快速筛选，目前多作为少数样本的确证性分析方法。相较于HPLC等仪器法，毛细管电泳法具有色谱柱不易污染、分析速度快、操作简便、成本低等优点，但准确度和灵敏度不及HPLC法。

ELISA方法虽具有简单、快速、灵敏的特点，但是在性能上还是着一些不足，如灵敏度偏低，反应时间过长等问题。因此，建立一种简单、可靠、特异、敏感、快速有效的检测方法有很大的实际意义。化学发光免疫分析（CLIA）是化学发光和免疫分析结合的产物,将发光物质直接标记到抗原或抗体上,与抗体或抗原发生特异性免疫反应后，通过测定标记物的化学发光强度确定被测抗体或抗原的含量。因为该体系不仅保留了酶联免疫分析的主要优点，并且具备化学发光法的高灵敏度，在检测灵敏度、特异性、准确度及精密度方面均可与放射性免疫分析相媲美，所需原料价格较低，发光增强剂的种类多，检测仪器普及，易于操作，具有检测范围宽、灵敏度高、分析速度快、价廉经济等优点，是免疫分析的重要发展方向，在医学、环境、食品分析等方面具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒。

本发明的另一目的在于提供上述恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒的使用方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种恩诺沙星的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括包被有恩诺沙星抗原的化学发光酶标板，恩诺沙星标准品，恩诺沙星酶标抗体，化学发光液和洗涤液；所述的恩诺沙星抗原为培氟沙星与卵清蛋白（OVA）的偶联物，恩诺沙星抗原的包被浓度为0.5 mg/L。

所述培氟沙星的结构如式（Ⅰ）所示。

               式（Ⅰ）

优选地，所述的化学发光酶标板优选为96孔可拆不透明白色发光板。

优选地，所述包被恩诺沙星抗原的包被液优选为将1.69g碳酸钠和 2.95g碳酸氢钠溶于1L双蒸水中得到。