[发明专利]盐酸赛庚啶的免疫胶体金检测卡及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及动物源食品添加剂检测技术领域，特别是涉及盐酸赛庚啶的免疫胶体金检测卡及其制备方法。

背景技术

盐酸赛庚啶（Cyproheptadinehydrochloride，分子式：C₂₁H₂₁N·HCl)是一种抗组胺药，具有抗5-HT、阻断H1受体及抗胆碱作用，主要用于治疗荨麻疹、湿疹、接触性皮炎、皮肤瘙痒、过敏性鼻炎等，其常见的副作用为轻、中度的嗜睡、头昏、乏力、口干等。食用含有盐酸可乐定和盐酸赛庚啶残留的动物源性产品，对人体健康具有一定的危害性。农业部于2010年12月27日发布1519号公告，禁止在饲料和动物饮水中使用盐酸可乐定和盐酸赛庚啶。但在饲料安全预警预测监测工作中，发现国内某些饲料产品添加盐酸赛庚啶。因此，加强对盐酸赛庚啶残留的检测迫在眉睫。目前对它们的研究主要在医药领域，仅有饲料中盐酸赛庚啶的检测标准方法，而动物尿液和动物组织中残留的相应检测方法和限制标准未见研究报道，由此造成了食品安全监测的盲区。检测动物尿液中盐酸赛庚啶的含量显得更直接、方便，且可实现宰前检测，为及时排除食品安全隐患，保障食品的质量安全，特开展本试验方法研究。

现有技术对于盐酸赛庚啶的检测主要是高效液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱法等检测方法，但这些技术的缺陷明显：设备昂贵、操作复杂、难以推广。所以，建立一种简单、有效、适合基层使用的测定方法是极其必要的。本发明的目的是研制一种更适合企业进行现场检测且快捷简便、成本低廉的定性检测方法。

发明内容

针对以上情况，本发明的目的就是为了克服现有技术存在的缺陷而提供一种盐酸赛庚啶的免疫胶体金检测卡及其制备方法，可有效解决能快速、简便地检测出β-肾上腺素受体激动剂盐酸赛庚啶的问题。

本发明的盐酸赛庚啶胶体金检测卡，包括包被了单克隆抗体胶体金标记物的胶体金结合垫、包被了盐酸赛庚啶-BSA和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜、样品垫、吸水垫、PVC胶板和塑料模具组成，在PVC胶板的一端依次粘附样品垫、结合垫，中间黏贴硝酸纤维素膜，另一端粘附吸水垫。

本发明的盐酸赛庚啶胶体金检测卡的制备方法，是由以下步骤实现：

(1)胶体金溶液制备：取1L三角烧瓶1个，加入超纯水495mL，而后加入1%氯金酸(HAuCl₄·3H₂O)5mL，配制成500mL0.01%氯金酸水溶液，加热煮沸后在持续搅拌的情况下加入1%柠檬酸三钠(Na₃C₆H₅O₇·2H₂O)溶液5-7mL，继续搅拌加热，当溶液的颜色完全变为透明的紫红色时，维持5min后停止加热，补水至原体积，冷却至室温，2-8℃保存备用；

(2)抗体的预处理：将要标记的盐酸赛庚啶抗体在1000r/min,4℃条件下，离心20min，取上清，用0.01mol/LPBS稀释成1mg/mL；或者用0.01mol/LPBS稀释成1mg/ml，过0.22μm滤膜；

(3)胶体金标记物的制备：取步骤(1)中的胶体金溶液40mL，用0.25mol/LK2CO3调节胶体金溶液pH至8.5，电磁搅拌器250r/min搅拌，逐滴加入4mL含0.3mg抗体蛋白的蛋白溶液，反应10min；逐滴加入4mL10%BSA，继续搅拌反应10min；金标抗体溶液常温低速（1500r/min）离心10min，弃去由凝聚的金颗粒形成的沉淀；红色上清溶液4℃，12000r/min离心20min，弃上清，收集沉淀，将沉淀用金标抗体稀释液定容至1mL，制备成盐酸赛庚啶单克隆抗体胶体金标记物；

(4)胶体金膜的制备：将步骤(3)盐酸赛庚啶蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物用划膜仪以5μL/cm的浓度均匀喷在载体玻璃纤维素膜上，室温自然晾干或者37℃烘干3h，制成含盐酸赛庚啶蛋白质偶联物单克隆抗体胶体金标记物的胶体金膜；

(5)包被膜制备：将羊抗鼠IgG抗体、盐酸赛庚啶蛋白质偶联物稀释成1mg/mL，用划膜仪依次以1μL/cm的浓度喷涂在硝酸纤维素膜上，制备成包被膜，37℃包被2h后，室温自然晾干或者37℃烘干；

(6)样品垫前处理：将样品垫处理液均匀涂布在玻璃纤维素膜上，在空气湿度低于60%的条件下，室温自然晾干；

(7)检测卡的组装：PVC胶板自上而下依次粘贴样品垫、胶体金膜、包被膜和吸水棉，组装成试纸条，切割成一定宽度的长条，再将试纸条安装在长条扁平壳状的检测卡外壳中。