[发明专利]一组评估乳腺癌分子分型基因群及其检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一组评估乳腺癌分子分型基因群及其检测试剂盒。

背景技术

乳腺癌在都市人群中的发病率自20世纪80年代末开始一直呈上升趋势，已渐渐成为对都市女性威胁最大的恶性肿瘤。最新调查结果显示：目前上海每年新发乳腺癌的病人已经超过4500人，发病率高居全国榜首。每300名上海女性中，就有1名患乳腺癌。就全国来说，每年大约有30万女性乳腺癌新发病例，并以每年2-3％的比例在上升。美国2013年数据显示，1期乳腺癌的生存率到达100％，2期达到93％，3期达到72％，1990-2007年期间，美国乳腺癌的死亡率以每年2.2％的速度下降，与此同时，中国的乳腺癌死亡率却上升了155％。导致这个差距的重要原因之一是，美国80％的乳腺癌诊断于早期，而中国只有大约20％的乳腺癌患者诊断于早期。对乳腺癌患者的个性化管理，将是提升乳腺癌患者生存率的一大关键点。

乳腺癌并非一个简单的单一疾病，而是包括了多种具有不同细胞来源、体细胞突变和病因的肿瘤亚型。因此，乳腺癌病人的病程会有极大差别。常规临床上常用分期、分级结合激素受体状态来显示这些差异)。遗憾的是这些参数对疾病结果的预测能力有限，所以乳腺癌病人常常面临如何选择系统的治疗方案的难题。原发性乳腺癌的基因表达分析揭示了肿瘤内在的异质性，而且作为一种新的分子分型方法弥补了现有标准分级的不足。斯坦福大学前期应用基因表达谱划分的五种乳腺癌亚型是来源于两类功能完全不同的细胞类型，基底细胞和管腔上皮细胞(Perou,C.M.,T.Sorlie,et al.2000；Hu,Z.,C.Fan,et al.2006)。这一分类是基于一种“本征”分析，为一种统计方法，可以发现同一肿瘤内表达差异很小而不同肿瘤间表达差异很大的基因。这些基因可以最好地反映出肿瘤的本征和固有特性。而基因表达的检测则是亚型分型的最佳方法。目前，基于基因表达对乳腺癌进行分型和预后分析的产品主要有Genomic Health的Oncotype Dx，Agendia的MammaPrint以及Prosigna的PAM50。

Oncotype DX是针对早期、雌激素受体阳性乳腺癌患者复发的危险性以及化疗是否对患者有一的一种检测。Oncotype DX采用定量PCR的方法，通过分析肿瘤组织中21个基因的表达来计算出一个“癌症复发风险”。复发指数是一个0到100之间的数值，以此预测初期诊断后10年复发的危险。通过对患者危险度进行低、中、高分类，帮助医生和病人决定治疗方案，尤其是是否需要化疗或仅需内分泌治疗，以避免过度治疗。

MammaPrint是评估乳腺癌是否会转移到身体其他部位的一种检测。也可以帮助医生判断化疗是否对患者有益。MammaPrint采用基因芯片的方法检测肿瘤组织中70个乳腺癌相关基因表达。2007年2月，美国FDA批准了MammaPrint可用于对淋巴结阴性、雌激素受体阴性或阳性且肿瘤小于5厘米的任何年龄的乳腺癌患者进行检测。

PAM50同样是用于评估乳腺癌10年内远处转移的危险性的一种检测。PAM50采用NanoStringDx分析系统检测55个基因表达水平，结合增殖系数、肿瘤体积和其他一些临床变量来计算Prosigna分数(0-100)，以此预测复发危险及内分泌治疗或联合治疗效果。PAM50适用于淋巴结阴性和阳性、HER2阴性患者的评估，目前已获得美国FDA批准。

现有的乳腺癌基因表达分子分型的方法仍然存在着一些缺陷和不足。首先，现最为重要的缺陷在于由于缺乏有效的分析手段，无法识别乳腺癌预后及治疗效果密切相关的免疫调控基因并将其纳入分析系统，使最终的分型评分系统有一定局限性，尤其是结果不能配合指导目前日益受到重视的肿瘤细胞免疫治疗方案。其次，以上所有测试体系的研发均在美国或欧洲进行，所纳入的病例种族绝大多数为高加索人、少量非洲人和极少数的亚洲人，中国人对测试体系的敏感性和特异性尚未得到有效验证。第三，每种检测体系在敏感度、检测能力都有一定局限性。第四、所有检测的检测成本均相对较高，不适合当前我国的经济条件。第五，目前的测试方法只提供复发指数给医生作为参考，没有明确提供分子分型的结果。实际上分子分型可以进一步指导治疗方案。

发明内容