[发明专利]一种黄毛藜豆的组培快繁方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种黄毛藜豆的组培快繁方法。

背景技术

黄毛藜豆（Mucuna bracteata DC. ex Kurz），属豆科（Leguminosae）藜豆属（Mucuna）多年生缠绕藤本，生于海拔600-2000米的林中或草地、山坡、路边或溪旁，主要分布于马来西亚、缅甸、泰国、越南等东南亚国家，我国云南和海南也有零星分布。其寄生根瘤菌具有生物固氮功能，且在丰富土壤营养物质、改良土壤物理性状和提高土壤保水保肥性能等方面具有重要作用，因此，在巴西橡胶树、油棕等经济作物的种植过程中常以黄毛藜豆作为覆盖作物。

近年来，随着我国经济社会的发展，传统农业的种植和耕作模式已经不能适应现代社会的发展需要，推广应用绿肥套种技术建设生态胶园、油棕园、果园，建设优质、高产、低耗的农业生态系统，走生态农业道路是现代农业的发展方向之一。黄毛藜豆作为一种理想的绿肥覆盖植物，被广泛应用于橡胶、油棕等多种重要经济作物的种植过程中，对其种苗的需求量也急剧增加。然而，由于黄毛藜豆存在种子不易收集，且种子在自然条件下发芽率低等问题，种苗的需求量已经呈现出明显的供不应求趋势。通过组织培养途径实现黄毛藜豆的人工繁殖可满足日益增长的市场需求，目前，有关黄毛藜豆组织培养形成再生植株尚未见报道。本发明以黄毛藜豆无菌苗子叶节为外植体诱导丛生芽，最终实现植株再生。

发明内容

本发明的目的是解决黄毛藜豆种子不易收集，且自然条件下发芽率低，而目前生产上对其种苗的需求量急剧增加的问题，通过采用生物技术手段，提供一种黄毛藜豆的组培快繁方法，以建立一个高效的黄毛藜豆组培快繁技术体系。

本发明解决所述技术问题的方案是：一种黄毛藜豆的组培快繁方法，它包括以下步骤：

1）黄毛藜豆外植体的采集与消毒：采集黄毛藜豆成熟、健康的种子，用清水洗净后置于超净工作台上，先用体积百分比浓度70%～75%乙醇处理20～40s，无菌水冲洗4～5遍后用0.05 %～0.15 %的HgCl₂水溶液浸泡灭菌10～20min，再用无菌水冲洗4～5遍，无菌滤纸吸干表面水分，用手术刀在种背部轻轻划出一道小口，接种到附加30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂，pH为5.8，且已在温度121℃、压力1.1 kg·cm^-2的条件下灭菌20 min的MS培养基上；接种后放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2000～3000 lx，光照时间为12h·d^- 1的条件下进行培养；

2）黄毛藜豆丛生芽的诱导与增殖：种子经过3～5d的培养后胚根伸出，10～12 d 后，上胚轴伸长，两片子叶逐渐展开，分别将子叶展开而第一片真叶尚未展开的无菌幼苗的子叶节切下后接种到已在温度121℃、压力1.1 kg·cm^-2的条件下灭菌20 min的诱导丛生芽培养基中，接种后放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2 000～3000 lx ，光照时间为12 h·d^- 1的条件下进行培养；其中，该培养基配方为：MS+ NAA 0.05mg / L+ 6-BA 1.5 mg / L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，该培养基pH为5.8，其中MS为基本培养基；

 3）黄毛藜豆壮苗生根培养：选择健壮的、植株高度在5～8cm的单个丛生芽，切下后接种到已在温度121 ℃、压力1.1 kg·cm^-2的条件下灭菌20 min的壮苗生根培养基中，接种后的丛生芽小植株放在温度为27℃±1℃，光源为日光灯，光照度为2 000～3 000 lx ，光照时间为12 h·d^- 1的条件下进行培养；其中，该培养基配方为：1/2 MS+ NAA 0.5 mg/ L，附加30g/L蔗糖和6.5g/L琼脂，该培养基pH为5.8，其中1/2MS为基本培养基；

4）黄毛藜豆的炼苗与移栽：取培养30～50 d，根系发达，植株高为10～15 cm的黄毛藜豆组培苗，预先室内进行开盖炼苗3 d，洗净根部附着的培养基，放入0.05～0.15%多菌灵水溶液中浸泡消毒10～20 min后，移栽到预先消毒处理过的沙床中，浇水淋透，适当保湿遮荫。