[发明专利]一种温敏水凝胶微生物培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型微生物培养基，具体涉及一种温敏水凝胶微生物培养基及其制备方法。

背景技术

自20世纪40年代以来，有关水凝胶的理化性质、合成、在生物化学、医学应用领域的研究十分活跃(参见文献：翟茂林，哈鸿飞；水凝胶的合成、性质及应用，[J].大学化学，2001；16(5)：22-27)。水凝胶在水中能溶胀保持大量水分而又不溶解的交联聚合物，根据络合健的不同分为物理凝胶与化学凝胶，根据材料的不同又分为化学合成凝胶与天然高分子凝胶。天然高分子凝胶具有良好的生物相容性、对环境敏感性、丰富的原料和低廉的价格，因而正引起越来越多学者的重视。徐斌等研制的壳聚糖水凝胶，可用于组织工程化心肌的支架材料(参见文献：徐斌，段翠密，郝彤，等；壳聚糖水凝胶的研制及其与C2C12细胞粘附、支持作用的实验研究，[J].生物医学工程研究，2008；27(2)：122-124)。壳聚糖与磷酸甘油三钠按一定的比例混合，制成温敏性水凝胶，用于组织工程支架材料(参见文献：闫继红，孙海梅，尚宏伟，等；可注射性壳聚糖基温敏性凝胶的制备及其生物相容性，[J].吉林农业大学学报，2011；33(5)：522-526)。水凝胶的主要应用包括：日用品，作为一种高吸水性材料，广泛用于妇女卫生巾、儿童尿不湿、缓释型香精、纸巾等。工业用品主要用于溶剂脱水、金属离子浓集、空气过滤、废水处理等。农业土建上主要用于保水、污泥固化、水泥添加剂、绿化沙漠等。生物医学上主要用于烧伤涂敷物、药物传输、补齿材料、移植、隐型眼镜、细胞固化等。

传统的固体及半固体微生物培养基是在培养基中加入凝固剂，如琼脂、明胶、硅胶等，其原料价格较贵。由于壳聚糖公知的抑菌功能，作为微生物培养基的应用尚未见报导。

发明内容

本发明的研究者意外地发现，当壳聚糖用作温敏水凝胶微生物培养基时，经培养的菌落数量和生长的速度与常规方法培养结果基本一致，进而研发了一种壳聚糖基温敏水凝胶微生物培养基及其制备工艺。

为实现上述目的，本发明包括如下技术方案：

一种温敏水凝胶微生物培养基，该培养基由下述成分制成：壳聚糖1-5重量份，交联剂0-2重量份，温敏剂20-50重量份，微生物特异性显色剂0.2-0.4重量份，微生物鉴别培养基100重量份和pH调节剂调节pH值为7.0-7.2。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述壳聚糖为N-脱乙酰度在70～90％的壳聚糖及其衍生物。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述交联剂选自聚乙烯醇、戊二醛和异丁醇中的至少一种。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述温敏剂选自α甘油磷酸钠、β甘油磷酸钠和无水甘油磷酸钠中的至少一种。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述微生物特异性显色剂为TTC指示剂、碘、三糖铁、磷钼酸、磷酸铋钾、甲基红、考马斯亮蓝G-250、七叶灵、5-溴-4-氯-3-吲哚-肌醇磷酸、5-溴-4-氯-3-吲哚-葡萄糖吡喃糖苷酸、邻硝基酚β-D葡萄糖苷酸酶、丙烯乙二醇、5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D半乳糖吡喃糖苷酸、甲苯胺蓝、甲基绿、丫啶橙和5-溴-4-氯-3-吲哚-胸苷-3-磷酸中的至少一种。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述微生物鉴别培养基为营养肉汤培养液、酪素培养基、明胶培养基、淀粉培养基、H2S试验培养基、糖发酵培养基、远藤氏培养基或伊红美蓝培养基。

如上所述的温敏水凝胶微生物培养基，优选地，所述磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化铵、碳酸钠或碳酸氢钠。

另一方面，本发明提供如上所述的温敏水凝胶微生物培养基的制备方法，该方法包括如下步骤：

A.按照权利要求1所述成分和配比称取试剂，将各试剂和容器进行无菌处理；

B.壳聚糖溶于微生物鉴别培养基中；在室温条件下往该培养基中加交联剂，持续搅拌下交联反应10-45分钟，形成清亮液体；

C.在冰浴条件下往交联反应后的液体中逐滴加入温敏剂，搅拌30-60min至清亮溶液，加入微生物特异性显色剂，搅拌溶解，用pH调节剂调节体系pH值到7.0-7.2。

再一方面，本发明提供一种温敏水凝胶微生物培养基，其是采用如上所述方法制备的。