[发明专利]一种生物复合型木霉抑制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于防治食用菌木霉污染的微生物技术领域，特别涉及一种生物复合型木霉抑制剂及其制备方法。

背景技术

木霉引起的绿霉病是食用菌生产过程中最大的威胁，生产上通常采用化学药剂防治，一旦在出菇期采用不得当的农药防治，就会造成农药的残留。且长时间使用单一化学药剂会使病害抗性增强，防治效果降低，且残留量大，对人体健康构成威胁，并且污染环境。近年来国内外开发代替化学农药的植物提取物如木醋液、植物熏蒸物、小桐子提取物一类提取物质控制木霉危害，虽然抑菌效果较好，但以上成品制造成本高、产率较低。因此利用微生物防治木霉具有较好的应用前景。目前已有用来防治木霉的微生物菌株以及抗生素，如枯草芽孢杆菌、纳他霉素等。虽然微生物对木霉的抑制效果较好，但是将能够抑制木霉的微生物菌株复配从而达到更好的抑制效果，并没有报道。

发明内容

本发明的目的是解决现有防治木霉的药剂存在的防治效果低、残留量大和制造成本高的技术问题，提供一种生物复合型木霉抑制剂及其制备方法。

为解决上述技术问题，本发明采取的技术方案为：

一种生物复合型木霉抑制剂，它是由枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041分别进行单菌种发酵培养制成发酵液，然后将两种发酵液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；或者将两种发酵液的菌体过滤后剩余的滤液按照重量比为1～5：5～1的比例混合均匀制成生物复合型木霉抑制剂；其中生物复合型木霉抑制剂中枯草芽孢杆菌ACCC11088的菌数为0.5亿/mL～40亿/mL，泾阳链霉菌ACCC40041的菌数为0.5亿/mL～20亿/mL。

本发明生物复合型木霉抑制剂的制备方法包括如下步骤：

(1)单菌种发酵液的制备：

枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液的制备：将枯草芽孢杆菌ACCC11088在无菌条件下接种到液体培养基中，在30℃、180r/min条件下发酵培养，镜检80％形成芽孢制成，其中所述的液体培养基为：各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：蛋白胨9～11g，牛肉膏3～5g，氯化钠4.5～5.5g，PH调至7.2～7.4之间；

泾阳链霉菌ACCC40041发酵液的制备：泾阳链霉菌ACCC40041在无菌条件下接种到高氏Ⅰ号液体培养基中，在28℃、180r/min条件下发酵培养，发酵进行5～7天制成，其中所述高氏Ⅰ号培养基为：各组分在1.0L蒸馏水中的含量为：可溶性淀粉：18～23g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.4～0.6g，七水硫酸镁0.4～0.6g，氯化钠0.4～0.6g，七水硫酸亚铁0.01g，PH调至7.4～7.6之间；

(2)复合木霉抑制剂的制备：

将步骤(1)制备得到的枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液和泾阳链霉菌ACCC40041发酵液按照重量比为1～5：5～1的比例混合制成；

或者是将枯草芽孢杆菌ACCC11088发酵液和泾阳链霉菌ACCC40041发酵液分别过滤，取各自的滤液按照重量比为1～5：5～1的比例混合制成。

本发明复合木霉抑制剂由两种有益微生物复合而成，分别是中国微生物菌种保藏管理委员会农业微生物中心保存的枯草芽孢杆菌ACCC11088和泾阳链霉菌ACCC40041。它们能够在食用菌菌丝生长初期有效的抑制食用菌木霉的生长，同时不会抑制食用菌菌丝的生长，且对人畜无毒无害。

为进一步表明本发明生物复合型木霉抑制剂的效果，本发明做了如下实验：

一、从发病的平菇、香菇和金针菇的栽培料中分离木霉真菌，为木霉拮抗实验提供病原菌，具体步骤如下：

1、从发病的平菇、香菇和金针菇栽培料或子实体上挑取木霉孢子于PDA平板上，置于26℃培养，观察培养好的平板，选择生长数量多的、绿色菌落进行纯化，挑取菌丝划线于PDA平板上，26℃培养，待得到纯的菌落后，接种于PDA斜面试管，保存于4℃冰箱中；纯化的木霉菌在PDA培养基上于26℃黑暗培养,每天观察菌落的形态特征和颜色,测量菌落直径并挑取菌丝及孢子制片,于显微镜下观察分生孢子梗分枝方式、产孢细胞和孢子的形态；

2、经分离纯化，从香菇上分离出一株木霉菌编号为XG，从平菇上分离出两株木霉菌编号为M3，M5，从金针菇上分离出一株木霉菌编号为JZG，各菌株的特征为如下：