[发明专利]一种用于检测盐酸赛庚啶的酶联免疫试剂盒的制备

权利要求书

1.检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，包括酶标板、盐酸赛庚啶标准品、盐酸赛庚啶酶标抗体工作液、底物液A、底物液B、终止液和浓缩洗涤液。

2.检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，包括以下步骤：酶标板的制备、盐酸赛庚啶标准品的制作、盐酸赛庚啶单克隆抗体及酶标抗体工作液的制备、洗涤液的制备、底物液A的制备、底物液B的制备、终止液的制备。

3.根据权利要求2所述盐酸赛庚啶的检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，其特征在于：所述的盐酸赛庚啶包被抗原是将盐酸赛庚啶半抗原与载体蛋白偶联得到的，该载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)；用0.05mol/LpH9.6的碳酸盐(CBS)缓冲液作为包被液，将盐酸赛庚啶抗原稀释成1：40000比例，100μL/孔，37℃放置2h，取出酶标板甩掉板内液体，用稀释后的浓缩洗涤液300μL/孔，洗板2次，30s/次；然后加入0.5%牛血清白蛋白(BSA)封闭，150μL/孔，37℃放置1.5h，弃去封闭液，拍干后的酶标板放置恒温间(25℃)晾干；抽检合格后将酶标板真空密封后置4℃下保存。

4.根据权利要求2所述盐酸赛庚啶的检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，其特征在于：所述的盐酸赛庚啶标准品浓度分别为0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。

5.根据权利要求2所述盐酸赛庚啶的检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，其特征在于：所述的盐酸赛庚啶酶标抗体工作液的制备：采用辣根过氧化酶偶联盐酸赛庚啶单克克隆抗体所得到，该酶标抗体工作液用抗体稀释液稀释成1:20000。

6.根据权利要求2所述盐酸赛庚啶的检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，其特征在于：所述底物液A为含有0.5mmol/L的过氧化氢脲的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲溶液；所述底物液B为四甲基联苯二胺的乙醇溶液；所述终止液为2mol/L的硫酸；所述浓缩洗涤液是10倍浓缩洗涤液，其包含0.5%吐温-20，0.01mol/L的PBST，pH值范围7.0-7.5之间。

7.权利要求2所述的检测盐酸赛庚啶的ELISA试剂盒的制备，基于抗原抗体进行直接竞争酶联免疫反应，该方法包括以下步骤：

(1)预处理待测样品；

(2)将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；

(3)取包被有盐酸赛庚啶抗原的酶标板，加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中；

(4)加入酶标抗体工作液，50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温25℃避光环境中反应30min；

(5)小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300μL/孔，充分洗涤4次，浸泡15-30s，用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)；

(6)加入底物液A50μL/孔，底物液B50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应15min；

(7)加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处或双波长450/630nm检测，测定每孔吸光度值（请在5min内读完数据）；

(8)以标准品测试的吸光度值与标准品的浓度对数值绘制标准曲线，对照标准曲线计算样品中盐酸赛庚啶的含量。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述处理后的样品是经过以下处理的样品：

取待检猪尿，若样品比较混浊时，可5000r/min以上，离心5min或过滤。