[发明专利]动力蛋白轻链路障-2型制备治疗肾衰竭药物的应用及其药物

说明书

技术领域

本发明涉及动力蛋白轻链路障-2型制备治疗肾衰竭药物的应用及其药物。

背景技术

肾脏纤维化导致终末期肾功能衰竭，由于TGF-beta/Smad信号调控在肾脏疾病中的细胞外基质的表达，所以针对TGF-beta信号是控制纤维化的一个有吸引力的治疗方法。然而，在TGF-beta信号传导途径的复杂性使得选择适当的治疗靶点困难。尤其是，针对在TGF-beta信号传导途径中的单个元素的方法被证明效用不大。

在过去的十年中，许多策略以直接阻断TGF-beta影响已经被开发，包括使用TGF-beta的中和抗体、抑压TGF-beta的寡脱氧核苷酸(ODN)、可溶性人类TGF-betaⅡ型受体，或TGF-beta受体激酶的特异性抑制剂。然而，通过深入调查后，发现采用这些策略作没有产生如预期的有效的结果。这可能是由于封锁TGF-beta信号上游传导途径会损害TGF-beta的有效的抗发炎特性，并随后促进肾脏炎症。另一方面，细胞内的Smad通路的串扰会阻碍靶向TGF-beta与TGF-beta受体激酶的策略。

发明内容

本发明的主要目的在于针对现有的治疗肾病的药物的不足，提供动力蛋白轻链路障-2型在制备治疗肾病如肾衰竭糖尿病药物中的应用及其药物。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种将抑制动力蛋白轻链路障-2型的物质用于制备治疗肾病糖尿病药物的应用，其中使用敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒制作所述药物。

优选地：

将所述敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒与微泡造影剂混合以制作所述药物。

所述微泡造影剂为六氟化硫微泡造影剂，优选造影剂(Bracco imaging B.V,Plan-Les-Quates Geneve,Switzerland)。

所述敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒与所述微泡造影剂的体积比为1:1。

构造敲低动力蛋白轻链路障-2型的质粒是将一个针对动力蛋白轻链路障-2型信使RNA(messenger RNA)的短发夹RNA(shRNA)合成在载体中，以产生一个动力蛋白轻链路障-2型的小发夹RNA，其中，所述短发夹RNA的序列为(GGA CAA CTC AAC AAC TGT TCA ATA T)。优选地，所述载体为pSilencer4.1载体(Invitrogen，Carlsbad,VA,USA)。

采用不含内毒素的质粒试剂盒产生所述敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒。

制作含1μM/ml的敲低动力蛋白轻链路障-2型的shRNA质粒的微泡的静脉注射剂。

一种治疗肾病糖尿病的药物，含有敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒。

还含有微泡造影剂，优选地，所述敲低动力蛋白轻链路障-2型质粒与所述微泡造影剂的体积比为1:1。

采用含1μM/ml的敲低动力蛋白轻链路障-2型的shRNA质粒的静脉注射剂。

本发明的有益效果：

本发明提供抑制动力蛋白轻链-2型以治疗肾脏疾病的药物及其制备方法。动力蛋白轻链路障-2型在肾脏疾病过程中影响Smad3的激活。因此，通过这抑制动力蛋白轻链-2型的表达特异性压制Smad3蛋白的磷酸化机制去调控Smad3的激活。此外，我们证明了抑制动力蛋白轻链-2型也减少了Ⅰ型胶原的表达及α2(Ⅰ)胶原启动子活性。我们还发现，压制动力蛋白轻链-2型的表达抑制在肾小管上皮细胞纤维化过程中α-SMA的表达，这可能是因为抑制动力蛋白轻链-2型废除自分泌TGF-beta信号通路在肾脏纤维化过程中的激活。

结果表明，压制动力蛋白轻链-2型抑制TGF-beta信号下游途径及阻止过度的细胞外基质生成，动力蛋白轻链-2型的抑制将会是打击慢性肾脏病的一种有效的治疗。

由于采用本药物的基因治疗能直接抑制肾疾病过程中TGF-beta/Smad3信号传导的激活，而且减少体内肾纤维化，在短期应用方面，采用本药物的基因治疗可以抑制直接施行在慢性肾脏病病人身上，去中止肾纤维化的进展，改善肾功能的表现。在长期来看，这种基因疗法可以用在防止肾脏疾病的发生，通过抑制TGF-beta信号在肾脏的任何异常激活，来减少肾纤维化的出现。

本发明提供的药物可用于实现一种新型、安全、有效、可控制的基因疗法来抑制TGF-beta介导的肾脏纤维化。

附图说明

图1A示出未使用本发明实施例的药物时和使用本发明实施例的药物之后的实时PCR检测结果；