[发明专利]用于诊断手足口病极重症的分子标记物及其检测方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术和医学诊断领域，特别是涉及一种用于诊断手足口病极重症的分子标记物及其检测方法与试剂盒。

背景技术

手足口病(Hand,foot,and mouth disease，HFMD)是一种常见传染病，以婴幼儿发病为主。引起手足口病的病原主要为肠道病毒属的柯萨奇病毒(Coxasckie virus)A组16、4、5、7、9、10型，B组2、5、13型；埃可病毒(ECHO viruses)和肠道病毒71型(EV71)，其中以EV71及CAl6型最为常见，EV71感染引起重症病例的比例较大。手足口病大多数患者症状轻微，表现为发热和手、足、口腔等部位的皮疹或疱疹。疾病进程为自限性，一般预后良好，但少数极重症患者可并发无菌性脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，个别极重症患儿病情进展快，易发生死亡；因此该疾病迫切需要寻找极重症手足口病的特异的生物标记分子，指导医生诊断和临床治疗，从而使极重症手足口病患者达到早发现、早诊断、早治疗的目标，为临床控制和预防极重症手足口病的发生、发展提供科学依据。

MicroRNA(miRNA)是一类生物体内自然形成的小分子非编码RNA，参与调节其特异靶基因的表达，从而达到调控蛋白的目的，具有调节发育时序，细胞增殖，分化，代谢，凋亡与应激以及参与脊椎动物心脏、肌肉以及神经系统的形成，同时具有调控疾病发生、发展的功能。约50％的已知人类miRNA基因定位于和肿瘤及疾病相关的染色体区域，而不断累积的研究成果也已充分证实miRNA的异常表达与疾病的发生，发展密切相关。基因芯片技术近些年来发展迅速，被广泛的应用于各个生命科学领域，包括疾病预测与诊断、基因突变检测、遗传学产前诊断等临床应用中，目前microRNA芯片已经成为筛选miRNA生物标志物的重要手段之一。

生物标记物是指能将机体的生理和疾病状态区分开来的生物分子，筛选到可用于疾病早期发现、早期诊断的生物标志物可大大提高患者的临床治疗效果。最新数据显示肿瘤组织普遍具有特征性的miRNA表达谱，即指肿瘤细胞中某些miRNA的表达水平异常，而这种异常的特征性miRNA可以成为用于肿瘤或疾病的诊断，病理分级，临床分期，治疗与预后的生物标志物，显示了较好的临床应用前景。

目前，由于手足口病对于婴幼儿具有很强的传染性，一般是通过临床症状和病毒鉴定来诊断手足口病，但没有明确的分子标记物来区别手足口病轻症和重症，造成许多小孩预后不良的结果。

发明内容

本发明的目的之一提供一种具有特异性区分能力，稳定性好，效率高及成本低的用于诊断手足口病极重症的生物标记物及其应用。

实现上述目的的技术方案如下。

血清中exosome里的miR-671-5p作为快速诊断手足口病极重症分子标记物的应用。

或者，血清中exosome里的miR-671-5p，以及选自miR-16-5p和miR-150-3p中的至少一种作为快速诊断手足口病极重症分子标记物的应用。

快速诊断手足口病极重症的分子标记物，该分子标记物包括有血清中exosome里的miR-671-5p。

进一步地，还包括有miR-16-5p和/或miR-150-3p。

本发明的另一目的，在于提供一种快速诊断手足口病极重症的试剂盒。

实现该目的的技术方案如下。

一种快速诊断手足口病极重症的试剂盒，包括有检测血清中exosome里的miR-671-5p的表达量的试剂。

在其中一个实施例中，进一步还包括有检测血清中exosome里的miR-16-5p和/或miR-150-3p的表达量的试剂。

在其中一个实施例中，进一步还包括有检测内参miR-642a-3p的表达量的试剂。

更进一步地，本发明还提供了一种快速诊断手足口病极重症的荧光定量PCR试剂盒。

一种快速诊断手足口病极重症的荧光定量PCR试剂盒，包括有

(A)针对血清中exosome里的miR-671-5p的反转录引物SEQ ID NO:5、以及荧光定量PCR检测引物对SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10，以及检测内参miR-642a-3p的表达量的试剂。

在其中一个实施例中，还包括有