[发明专利]从鸡粪发酵沼液中提取雌马酚的方法

说明书

技术领域

本发明涉及养殖和化工技术领域，特别地，涉及一种从鸡粪发酵沼液中提取雌马酚的方法。

背景技术

选用优质新鲜的鸡粪，在背风向阳处，将粪便和猪圏污泥以7:3的比例拌均匀，盖塑料布堆放7天左右。经池外堆沤的发酵原料，在晴天午后气温高时，趁料温高投入沼气池中，然后加入自来水，边加边搅拌，避免出现浮料，装料量占池容量的80％，干物质(即发酵原料)含量为4-6％。要注意加盖保温，及时封口。选取正常运转3个月时候的沼渣液进行分离提取。

雌马酚是1932年Marrian等人在怀孕雌马的尿液中分离羟雌酮时发现的，并确定他的分子式为C₁₅H₁₄O₃。由于雌马酚的发现源于马(equine)的代谢产物，且属于有雌激素作用的二元酚(diphenol)，所以被命名为‘equol’雌马酚。纯品为白色粉末，熔点：189-190℃，分子量：242.27。

雌马酚是大豆异黄酮(s Ⅰ)的主要成分之一——大豆素的代谢产物，可以代谢为具有一对对映异构体的外消旋化合物雌马酚。雌马酚较其原型具有更为有效的生物学作用。研究表明，雌马酚的一对对映异构体具有不同的生物学活性，其中S-型雌马酚远高于R-型雌马酚。关于雌马酚的合成，文献报道步骤较为繁琐，使用原料液较为昂贵，不适于工业化放大。

提取方法：肠粪链球菌HY-1，HY-2发酵豆芽中产物雌马酚的提取。

HY-1：屎肠球菌属，分离自人体新鲜粪样，GenBank数据库登录号JQ768054；

HY-2：Slackia属，分离自人体新鲜粪样，GenBank数据库登录号JQ796697。

取一定量的发酵豆芽粉，加入正己烷脱脂处理，离心过滤后取不溶物干燥，得到脱脂的豆芽粉。取脱脂发酵豆芽粉适量置于圆底烧瓶中水浴加热浸提，条件为乙醇体积分数80％,料液比1∶20(g/mL),提取温度为50℃,提取时间4h。浸提完成后将其离心过滤取滤液，旋转蒸发，得到无醇的浓缩液，真空干燥，除去余下水分，加入甲醇溶液溶解萃取物，即得到雌马酚粗提取物。

发明内容

本发明的目的是提供一种提取雌马酚的方法，在本发明的另一方面，还涉及从鸡粪发酵沼液中提取雌马酚的方法。为实现上述发明目的，本发明拟采用如下技术方案：

本发明涉及一种从鸡粪发酵沼液中提取雌马酚的方法，其特征在于包括如下步骤：

鸡粪发酵沼液在室温下50-70℃减压浓缩去掉70-85％水分得到沼液浓缩液，将沼液浓缩液与萃取溶剂按1：2进行萃取；先用石油醚进行萃取6次，合并浓缩后得石油醚萃取物；其次用乙酸乙酯对沼液浓缩液进行萃取6次，合并浓缩后得到乙酸乙酯萃取物；再次用正丁醇(NBA)对沼液浓缩液进行萃取6次，收集、浓缩得到正丁醇萃取物；

将沼液正丁醇萃取部分部分经300-400目硅胶柱层析，依次以30:1→25:1→20:1→15:1→10:1→5:1→1:1体积比氯仿/甲醇溶液梯度洗脱，洗脱液根据薄层色谱(TLC)检测结果合并、浓缩；搜集25:1和20:1洗脱部分F-(NBA)II；

将F-(NBA)II浓缩后经凝胶LH-20层析，以100％甲醇溶液进行等度洗脱，得到雌马酚。

在本发明的一个优选实施方式中，所述的萃取剂石油醚、乙酸乙酯和/或正丁醇重复使用。

本发明的方法条件温和,纯度高。而且本方法是从沼液中直接提取所得，所以操作方法简单,萃取剂可以循环往复多次利用，成本低。

附图说明

图1是本发明的从鸡粪发酵沼液中提取雌马酚的方法流程示意图。

具体实施方式：

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述。

实施例1

鸡粪发酵沼液在室温下60℃减压浓缩去掉80％水分得到沼液浓缩液，将沼液浓缩液与萃取溶剂按1：2进行萃取。先用石油醚进行萃取6次，合并浓缩后得石油醚萃取物；其次用乙酸乙酯对沼液浓缩液进行萃取6次，合并浓缩后得到乙酸乙酯萃取物；再次用正丁醇(NBA)对沼液浓缩液进行萃取6次，收集、浓缩得到正丁醇萃取物。