[发明专利]一种薄壳山核桃MADS-box类转录因子CiMAD9及其编码基因与应用

说明书

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，具体涉及一种薄壳山核桃MADS-box类转录因子CiMAD9及其编码基因与应用。

背景技术

植物的开花时间直接控制植物营养生长期和生育期的长短，在相当程度上决定着繁育的成功与否，也与植物的产量和质量性状密切相关。MADS-box是一个保守性很强的DNA结合结构域，最早在酵母Mini Chromosome Maintenance1(MCM1)、拟南芥AGAMOUS(AG)、金鱼草DEFICIENS(DEF)和人类血清应答因子Serum ResponseFactor(SRF)中发现，因此具有此结构的功能基因被命名为MADS-box基因。MADS-box基因参与所有植物花发育过程的调节。最初认为MADS-box基因主要参与花器官的形态建成，目前发现MADS-bo基因功能具有多样性，参与几乎所有器官的形态建成及从胚到配子体的生长发育的每一个阶段。有些MADS-box基因的功能是多方面的，具有多效性，不仅仅参与某一方面的调节，在植物发育中的各个层次和方向发挥作用。

发明内容

发明目的：

本发明的目的是提供一种薄壳山核桃MADS-box类转录因子CiMAD9。

本发明的另一目的是提供该转录因子CiMAD9的编码基因。

本发明的又一目的是提供该转录因子的功能。

本发明的目的可通过如下技术方案实现：

本发明所提供的一种薄壳山核桃MADS-box类转录因子，命名为CiMAD9，来源于薄壳山核桃(Carya illinoensis(Wangench.)K.Koch)优良品种‘马罕’，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明所述的的薄壳山核桃MADS-box类转录因子的编码基因，其cDNA序列如SEQ ID NO.1所示，含有768bp的最大开放阅读框，编码SEQ ID NO.2所示的255个氨基酸残基序列。

含有本发明CiMAD9基因SEQ ID NO.1的表达载体。

所述的表达载体优选将所述的薄壳山核桃MADS-box类转录因子CiMAD9的编码基因插入到pCAMBIA1301载体的KpnⅠ和SacⅠ酶切位点间所得。

宿主菌是指将pCAMBIA1301-CiMAD9转入的根癌农杆菌EHA105.

扩增CiMAD9cDNA全长的引物为：

CiMADS9-ORF sense：5'-ATGGGGAGAGGGAGGATAG-3'

CiMADS9-ORF antisense：5'-CCATCAGCCAAACCTTCT-3'

实时荧光定量RT-PCR分析中涉及的CiMAD9的qPCR引物为：

CiMADS9-qPCR sense：5'-GGTACAACGAGTGTGTAGATTCTCC-3'

CiMADS9-qPCR antisense：5'-TCCTCTCCTTCACAGACAATAACCC-3'

上述薄壳山核桃MADS-box类转录因子CiMAD9、其编码基因、含有编码基因的表达载体在培育晚花植物中的应用。

有益效果：

本发明在薄壳山核桃中克隆到一个MADS-box类转录因子CiMAD9基因，CiMAD9可能参与薄壳山核桃花发育、果实发育等生殖发育的大部分进程。CiMAD9编码基因在雄花、雌花和幼果中特异性表达。转基因拟南芥中过量表达CiMAD9编码基因，与对照组相比，转基因材料表现为晚花，开花时间推迟8d以上，开花时基叶数较WT增加6片以上。这一结果说明CiMAD9基因可以控制植物的成花转变过程，同时可以延长植株的营养生长。

本发明的CiMAD9对于培育晚花植物品种具有重要意义，在作物育种方面尤其是培育以营养器官为主的植物具有广泛的应用前景。

利用本发明的植物表达载体，将CiMAD9基因导入植物体内，可以获得开花延迟的转基因植株。

附图说明

图1CiMAD9基因在薄壳山核桃的表达特性

1，叶；2，当年生枝条；3，雌花；4，雄花；5，幼果

图2.CiMAD9过量表达表达载体的构建

图3.转CiMAD9基因拟南芥和对照组RT-PCR检测。

WT:野生型；1-5：转基因型