[发明专利]一种光甘草定含量的测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种光甘草定含量的测定方法，属于含量检测方法技术领域。

背景技术

甘草为豆科植物甘草GlycyrrhizauralensisFisch．、胀果甘草G.inflataBat.或光果甘草G.glabraL．的干燥根及根茎，具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药的功能。光果甘草中还含有特有的黄酮类成分光甘草定，它具有较强的抗炎，抗氧化和抗菌作用，应用前景广阔。

光甘草定能深入皮肤内部并保持高活性，美白并高效抗氧化。有效抑制黑色素生成过程中多种酶的活性，特别是抑制酪胺酸酵素活性。同时还具有防止皮肤粗糙和抗炎、抗菌的功效。光甘草定是目前疗效好、功能全面的美白成分。光甘草经过多年来的使用，作用明显，安全性好。是目前国际上高档美白化妆品的主要功效成分。

在专利号为201110230297.7的专利《香草醛-硫酸比色法测定光甘草定含量的方法》一文中采用香草醛-硫酸显色后，利用比色法来测定光甘草定的含量，但是香草醛-硫酸是一种通用显色剂，针对光甘草定不具有专一性，可见用来测定待测物种一类化合物的含量，比如说甘草中总黄酮的含量，其包括但不仅仅是光甘草定的含量。

而在《高效液相色谱法测定光果甘草中光甘草定的含量》等相关文献报导中，采用等度洗脱的方式，但光甘草定分离度不佳。

发明内容

为了克服现有技术问题，本发明的目的在于提供一种简便、快捷、重复性好的光甘草定含量的测定方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

一种光甘草定含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）设定高效液相色谱条件：温度为室温，相对湿度为25~40%，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以浓度为1%冰醋酸溶液为流动相B，洗脱方式为梯度洗脱，流速为0.8~1.2ml/min，柱温为25~40℃，检测波长为278~282nm；

（2）制备对照品溶液：将光甘草定对照品用有机溶剂溶解，形成对照品溶液，且所述的对照品溶液中，光甘草定对照品的浓度为0.1~0.5mg/ml；

（3）制备供试品溶液：将光甘草定粗提物用有机溶剂利用超声溶解5~20min，然后，冷却至室温，得到供试品溶液，且所述的供试品溶液中光甘草定粗提物的浓度为0.2~2mg/ml；

（4）含量测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，进行高效液相色谱仪的操作，并记录色谱图，然后，利用色谱图计算光甘草定粗提物中光甘草定的含量。

进一步，步骤（1）中，所述的室温的温度优选为20℃，相对湿度优选为35%，洗脱时的流速优选为1ml/min，柱温优选为30℃，检测波长优选为280nm。

此外，步骤（1）中，所述的梯度洗脱中流动相A和流动相B在不同的时间段的浓度关系如下表所示：

优选，步骤（1）中，所述的梯度洗脱中流动相A和流动相B在不同的时间段的浓度关系如下表所示：

而步骤（2）和步骤（3）中所述的有机溶剂为浓度为30-60%的甲醇。优选浓度为40%的甲醇。

步骤（2）中，所述的对照品溶液中，光甘草定对照品的浓度优选为0.2mg/ml。

步骤（3）中，所述的供试品溶液中光甘草定粗提物的浓度优选为1mg/ml。而超声溶解的时间则优选为15min。

本发明的有益效果为：本发明所述的方法具有专一性，能够准确的测定光甘草定的含量，而采用梯度洗脱进行分析，具有很好的分离效果，能够有效缩短分析时间，因此，具有所测成分分离度、线性关系、重现性、精密度、稳定性、回收率均较好的优势，能够准确，简便，快捷的得到光甘草定的含量。

具体实施方式

下面结合具体实施例详细说明本发明。

在本发明所述的实施例中，检测仪器为岛津高效液相色谱仪，包括LC 10ATvp plus二元泵、SPD 10Avp plus紫外检测器和LC-solution色谱工作站。乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。光甘草定粗提物由江苏天晟药业有限公司提供，光甘草定对照品由江苏天晟药业有限公司研发中心提供，且经¹H,¹³C鉴定，HPLC归一化纯度98%以上。

实施例1：

1、设定高效液相色谱条件：