[发明专利]VcLp15变体在基于TpN17的检测抗密螺旋体抗体的免疫测定中作为抗干扰添加剂

说明书

本发明涉及用于检测分离的样品中的抗苍白密螺旋体的TpN17抗原的抗体的方法，其中用霍乱弧菌脂蛋白15(VcLp15)的肽序列或其部分序列作为用于减少干扰(即用于最少化假阳性结果)的试剂。此外，本发明涉及包含VcLp15肽序列和分子伴侣的融合多肽，它们在免疫测定中作为用于减少干扰和用于最少化假阳性结果的添加剂的用途，及包含TpN17抗原和该VcLp15分子伴侣融合多肽的用于检测分离的样品中的抗苍白密螺旋体抗原的抗体的试剂盒。

技术领域

本发明涉及用于检测分离的样品中的抗苍白密螺旋体(Treponema pallidum)的TpN17抗原的抗体的方法，其中用霍乱弧菌(Vibrio cholerae)脂蛋白15(VcLp15)的肽序列作为用于减少干扰和用于最少化假阳性结果的试剂。此外，本发明涉及包含VcLp15肽序列和分子伴侣的融合多肽，它们在免疫测定中作为用于减少干扰和用于最少化假阳性结果的添加剂的用途，及包含TpN17抗原和该VcLp15分子伴侣融合多肽的用于检测分离的样品中的抗苍白密螺旋体抗原的抗体的试剂盒。

背景技术

梅毒(Syphilis，又名Lues)是由隶属于螺旋体细菌家族的苍白密螺旋体引起的严重感染性疾病。它主要通过性接触传播，但也可以在妊娠期间从孕妇传至胎儿。该疾病表征为不同的临床阶段和长的潜伏、无症状感染期。许多感染个体未注意到症状，因此多年未意识到其梅毒感染。初次感染有限，且通常引起小的无痛溃疡(第一阶段，“梅毒I(Lues I)”)。如果不进行青霉素治疗，则该疾病进展至第二阶段梅毒II(Lues II)(感染后约8周)，其产生流感样症状、非发痒性皮疹和肿胀淋巴结。几年后，在梅毒III(Lues III)阶段，全身出现梅毒结节(syphilitic node)。最后的阶段(梅毒IV(Lues IV))表征为中枢神经系统的破坏，最终导致神经和心脏障碍、全身麻痹(general paralysis)、共济失调、痴呆和失明。

虽然由于在20世纪中叶引入了青霉素而有有效的疗法可用，但梅毒仍是重要的全球性健康问题，估计全世界每年有一千二百万例新的感染。必须可靠地鉴别密螺旋体感染患者，以起始抗生素疗法，从而预防梅毒的进一步传播。因此，有必要提供可靠的诊断工具(如免疫测定)来检测抗苍白密螺旋体的抗体。但是，为了在血清学应用中用作特异性化合物，重组衍生的蛋白质必须满足几点要求，如溶解性、稳定性和抗原性。

TpN17(苍白密螺旋体菌株Nichols，17KDa)(其成熟形式是由134个氨基酸残基组成的小蛋白质)是苍白密螺旋体(梅毒的病原体)的免疫显性抗原(J.Clin.Lab.Immunol.(1998),50,27-44；Folia Microbial.(2003)48(4),549-553)。抗TpN17的抗体在密螺旋体感染的个体中常见且丰富，有必要在旨在敏感和可靠地检测密螺旋体感染的免疫测定中使用TpN17。

但是，我们观察到，用TpN17作为抗原的免疫测定倾向于显示假阳性结果，即它提供表面看来为阳性的信号，但实际上样品中不存在抗密螺旋体的抗体。这些干扰是罕见但显著的现象。它们损害了免疫测定的特异性，且它们显然是由梅毒免疫测定中实际上不可或缺的苍白密螺旋体抗原TpN17的使用引起。

因此，本发明潜在的问题可以视为提供用于检测抗密螺旋体抗体时避免假阳性结果和提高基于TpN17的免疫测定的特异性的工具和方法。

发明概述

通过权利要求所表征的本发明来解决该问题。具体而言，本发明涉及用于检测分离的样品中抗苍白密螺旋体的TpN17抗原的抗体的方法，其中用霍乱弧菌脂蛋白15(VcLp15)的肽序列或其部分序列作为用于减少干扰，即用于最少化假阳性结果的试剂。该VcLp15多肽序列的部分序列可以包含SEQ ID NO.1的氨基酸26-163。在另一实施方案中，该VcLp15肽序列或其部分序列与分子伴侣融合。