[发明专利]一种二肽基肽酶IV抑制肽及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种二肽基肽酶IV抑制剂及其制备，其以鹿胶原肽为活性成份，具有二肽基肽酶IV抑制活性。通过本发明制备的二肽基肽酶IV抑制剂，可应用于食品添加剂、功能食品、药品等领域，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域。

本发明涉及一种二肽基肽酶IV抑制肽及其制备，其以鹿胶原肽为活性成份，具有二肽基肽酶IV抑制活性。通过本发明制备的二肽基肽酶IV抑制肽，可应用于食品添加剂、功能食品、药品等领域，具有良好的应用前景。

背景技术

二肽基肽酶IV(dipeptidyl peptidase-IV DPP-IV)(EC3.4.14.5)是一种丝氨酸蛋白酶，广泛分布于人体内。DPP-IV通过对多肽的剪切使其失活，从而达到调节生理功能的作用。DPP-IV优先水解N-末端第二位上具有脯氨酸(Pro)或丙氨酸(Ala)的蛋白质。其作用底物包括：胰高血糖素样肽-1(GLP21_7-36)、抑胃肽(GIP_1-42)、神经肽(NPY)、YY肽(PYY)以及胰多肽家族(PP-family)等。这些物质的共同特点就是N-末端第二位的氨基酸残基或者是脯氨酸或者是丙氨酸残基。DPP-IV通过作用于以上多肽底物而在糖尿病、葡萄糖耐量、肥胖、食欲调节、高血脂症、骨质疏松、神经肽新陈代谢和T-细胞激活等相关疾病中起着重要的作用。因此，体内给予DPP-IV抑制剂可预防相关底物肽的N-末端降解，从而保障人体机能正常运行。

DPP-IV将完整的GLP-1和GIP反应切断N-末端2个氨基酸残基后，使其失活从而影响GLP-1和GIP相关的血糖调节等生理反应。体内给予DPP-IV抑制剂可预防GLP-1和GIP的N-末端降解，使胰岛素分泌物增加从而改善葡萄糖耐量。鉴于DPP-IV抑制剂与血糖代谢的密切关系，DPP-IV抑制剂已成为新型2型糖尿病药物的研究热点。

DPP-IV抑制剂通过影响胰岛素对葡萄糖的敏感性及β细胞，提高周围组织对胰岛素的敏感性，促进乳糜微粒和极低密度脂蛋白的分解，从而起到降脂的作用。基于同样的理由，DPP-IV也同时具有减肥等功能。因此具有广阔的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种二肽基肽酶IV抑制肽及其制备；其以鹿胶原肽为活性成份，具有二肽基肽酶IV抑制活性。本发明通过酶解、分离纯化的方法制备鹿胶原肽，制备工艺简单、条件温和，具有良好的应用前景。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

(1)以新鲜的鹿皮、鹿筋等为原料，鹿皮或鹿筋脱脂处理后用纯水清洗干净，剪为2～3平方厘米的碎片，鹿皮或鹿筋碎片按照1:1～100质量比加入0.01M缓冲液，再按1:10～500质量比加入蛋白酶，于20～50℃搅拌反应1～10小时。将上述反应液的pH用1M NaOH或1MHCl调至6～8，加入复合酶进行酶解，加酶量为反应物质量的0.1～1％，于20～70℃搅拌反应1～10小时，反应结束后90℃灭活20min。将上述反应液5000rpm离心5min，收集上清，冷冻干燥得到鹿胶原肽。

(2)干燥的鹿胶原肽用缓冲溶液或醇水溶液溶解，上凝胶柱分离，获得具有二肽基肽酶IV抑制活性的组分。

蛋白质水解酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、碱性蛋白酶或中性蛋白酶其中两种、三种、四种或五种酶组合使用。

以鹿胶原肽作为活性成份，用于药品、功能食品或食品的制备中；

其可制备成任何形式，例如口服剂型：粉剂、片剂、胶囊剂、软胶囊剂、水性药物、糖浆剂、酊剂、丸剂、散剂、小包、或颗粒剂；

外用局部制剂：乳膏、软膏、乳液、凝胶、半固体膏、贴剂糊膏、喷雾剂或气雾剂；

注射剂：溶液、悬剂、或乳剂。

本发明的特点如下：