[发明专利]一种制备普兰林肽的方法

权利要求书

1.一种制备普兰林肽的方法，所述方法包括以下步骤：

步骤1，通过液相合成二肽片段Fmoc-Pro-Pro-OH；

步骤2，采用固相合成法，以氨基树脂为起始树脂，按照普兰林肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中28、29氨基酸偶联采用片段Fmoc-Pro-Pro-OH偶联；

步骤3，使用碘作氧化剂固相环化，然后肽树脂裂解、然后在酸性条件下重结晶，纯化、脱盐、冻干后得到普兰林肽。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤1所述的二肽片段Fmoc-Pro-Pro-OH的合成方法包括如下步骤：Fmoc-Pro-OH和HOSu在DCC的作用下偶联得到Fmoc-Pro-OSu，然后Fmoc-Pro-OSu和H-Pro-OH反应得到二肽片段Fmoc-Pro-Pro-OH。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤2所述的固相合成方法，所述方法包括以下步骤：1)采用0.1-0.4mmol/g的氨基树脂为起始树脂；2)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除氨基树脂上的Fmoc保护基；3)在偶联剂系统的存在下，氨基树脂和Fmoc-Tyr(tBu)-OH偶联得到Fmoc-Tyr(tBu)-氨基树脂；4)重复步骤2)、3)，按照普兰林肽主链肽序依次偶联具有N端Fmoc保护且侧链保护的氨基酸，其中28、29氨基酸偶联采用片段Fmoc-Pro-Pro-OH偶联。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤3采用碘作为氧化剂固相环化，碘与肽树脂的摩尔比为(10-1)：1，反应温度为15℃-35℃，反应时间为2-5小时。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征是：

其中，步骤3在酸性条件下重结晶，酸性条件选自：pH＝2.0的磷酸盐缓冲溶液、pH＝2.5的磷酸盐缓冲溶液，pH＝5.0的磷酸盐缓冲溶液，pH＝5.8的磷酸盐缓冲溶液，pH＝3.6的醋酸-醋酸钠缓冲液，pH＝3.7的醋酸-醋酸钠缓冲液，pH＝3.8醋酸-醋酸钠缓冲液，pH＝4.5醋酸-醋酸钠缓冲液的一种。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征是：

所述二肽Fmoc-Pro-Pro-OH偶联过程中，H-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-氨基树脂、Fmoc-Pro-Pro-OH、DIC和HOBt的摩尔比为：1:3:3:3-1:5:5:5，反应温度为25-35℃，反应时间为2-3小时。

7.根据权利要求3所述的方法，所述氨基树脂选自Rink Amide AM Resin、Rink AmideMBHA Resin树脂；其中所述氨基树脂的替代度为0.10-0.40mmol/g。

8.根据权利要求7所述的方法，所述的氨基树脂优选Rink Amide MBHA Resin树脂；所述氨基树脂的替代度优选为0.15-0.35mmol/g。

9.根据权利要求3所述的方法，其特征是：所述偶联剂系统包括缩合剂和反应溶剂，所述缩合剂选自DIC/HOBt、PyBOP/HOBt/DIEA或HATU/HOBt/DIEA；所述反应溶剂选自DMF、DCM、NMP、DMSO或它 们之间的组合。

10.根据权利要求3所述的方法，其特征是：所述二肽Fmoc-Pro-Pro-OH偶联过程中，H-Thr(tBu)-Asn(Trt)-Val-Gly-Ser(tBu)-Asn(Trt)-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-氨基树脂、Fmoc-Pro-Pro-OH、DIC和HOBt的摩尔比为：1:3:3:3，反应温度为25℃，反应时间为2小时。