[发明专利]利用TALE转录抑制子在哺乳动物细胞中模块化构建合成基因线路

权利要求书

1.一种实现两种蛋白可调控式表达的方法，包括如下步骤：

将所述两种蛋白分别命名为蛋白甲和蛋白乙；蛋白甲的编码基因位于表达盒甲-Ⅰ，蛋白乙的编码基因位于表达盒乙-Ⅰ；

所述表达盒甲-Ⅰ自上游至下游依次包括如下元件：反馈元件的编码序列、启动子甲、通过自剪切多肽的编码基因连接的蛋白甲的编码基因和TALER蛋白甲的编码基因、靶序列甲-Ⅰ；所述靶序列甲-Ⅰ包括1个以上shRNA1的靶序列；

所述表达盒乙-Ⅰ自上游至下游依次包括如下元件：反馈元件的编码序列、启动子乙、通过自剪切多肽的编码基因连接的蛋白乙的编码基因和TALER蛋白乙的编码基因、靶序列乙-Ⅰ；所述靶序列乙-Ⅰ包括1个以上shRNA2的靶序列；

所述表达盒甲-Ⅰ中，所述启动子甲的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白乙的靶点，或，所述启动子甲的上游不具有所述TALER蛋白乙的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白乙的靶点；

所述表达盒乙-Ⅰ中，所述启动子乙的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白甲的靶点，或，所述启动子乙的上游不具有所述TALER蛋白甲的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白甲的靶点；

表达盒丙自上游至下游依次包括组成型启动子和激活元件的编码序列；

在所述激活元件的刺激下，位于所述反馈元件的编码序列的下游的DNA表达；

将具有所述表达盒甲-Ⅰ的重组载体甲-Ⅰ、具有所述表达盒乙-Ⅰ的重组载体乙-Ⅰ和具有所述表达盒丙的重组载体丙导入宿主细胞，通过加入shRNA1或shRNA2调控所述蛋白甲的表达和所述蛋白乙的表达。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述表达盒甲-Ⅰ中，所述启动子甲的上游具有1个所述TALER蛋白乙的靶点且其下游具有1-3个所述TALER蛋白乙的靶点；

所述表达盒乙-Ⅰ中，所述启动子乙的上游具有1个所述TALER蛋白甲的靶点且其下游具有1-3个所述TALER蛋白甲的靶点。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：

所述表达盒甲-Ⅰ中，所述启动子甲上游的TALER蛋白乙的靶点与所述启动子甲下游最邻近的TALER蛋白乙的靶点之间的距离为72-100bp；

所述表达盒乙-Ⅰ中，所述启动子乙上游的TALER蛋白甲的靶点与所述启动子乙下游最邻近的TALER蛋白甲的靶点之间的距离为72-100bp。

4.一种实现两种蛋白可调控式表达的方法，包括如下步骤：

将所述两种蛋白分别命名为蛋白甲和蛋白乙；蛋白甲的编码基因位于表达盒甲-Ⅰ，蛋白乙的编码基因位于表达盒乙-Ⅰ；

所述表达盒甲-Ⅰ自上游至下游依次包括如下元件：反馈元件的编码序列、启动子甲、通过自剪切多肽的编码基因连接的蛋白甲的编码基因和TALER蛋白甲的编码基因、靶序列甲-Ⅰ；所述靶序列甲-Ⅰ包括shRNA1-1的靶序列、……、shRNA1-n的靶序列，n为2以上的自然数；

所述表达盒乙-Ⅰ自上游至下游依次包括如下元件：反馈元件的编码序列、启动子乙、通过自剪切多肽的编码基因连接的蛋白乙的编码基因和TALER蛋白乙的编码基因、靶序列乙-Ⅰ；所述靶序列乙-Ⅰ包括shRNA2-1的靶序列、……、shRNA2-n的靶序列，n为2以上的自然数；

所述表达盒甲-Ⅰ中，所述启动子甲的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白乙的靶点，或，所述启动子甲的上游不具有所述TALER蛋白乙的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白乙的靶点；

所述表达盒乙-Ⅰ中，所述启动子乙的上游和下游各具有至少一个所述TALER蛋白甲的靶点，或，所述启动子乙的上游不具有所述TALER蛋白甲的靶点但其下游具有至少一个所述TALER蛋白甲的靶点；

表达盒丙自上游至下游依次包括组成型启动子和激活元件的编码序列；

在所述激活元件的刺激下，位于所述反馈元件的编码序列的下游的DNA表达；

将具有所述表达盒甲-Ⅰ的重组载体甲-Ⅰ、具有所述表达盒乙-Ⅰ的重组载体乙-Ⅰ和具有所述表达盒丙的重组载体丙导入宿主细胞，通过加入shRNA1-1、……、shRNA1-n、shRNA2-1、……或shRNA2-n调控所述蛋白甲的表达和所述蛋白乙的表达。