[发明专利]一种同位素茎秆双标记示踪方法有效
申请号: | 201410342182.0 | 申请日: | 2014-07-17 |
公开(公告)号: | CN104142382A | 公开(公告)日: | 2014-11-12 |
发明(设计)人: | 曾昭海;臧华栋;胡跃高;杨学超;陈恭 | 申请(专利权)人: | 中国农业大学 |
主分类号: | G01N33/00 | 分类号: | G01N33/00 |
代理公司: | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人: | 黄家俊 |
地址: | 100193 *** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 同位素 茎秆双 标记 方法 | ||
1.一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,该方法步骤如下:
(1)材料的准备;
(2)进行标记;
(3)取样与测定;
(4)计算。
2.根据权利要求1所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤(1)中准备的材料如下:气相色谱瓶、脱脂棉线、缝衣针、穿针器、铜丝、塑料管、丰度为99%的15N-尿素、丰度为99%的13C-葡萄糖,体积分数为75%的酒精水溶液、棉球、镊子、喷壶、U型铁丝。
3.根据权利要求1所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤(2)中进行标记的方法如下:在植物的营养生长末期进行标记,在植株待标记部位钻孔,用脱脂棉线穿过此孔,将脱脂棉线的两端插入装有标记溶液的试剂瓶中;所述脱脂棉线外套有塑料管,以防止标记溶液的损失;用铜丝固定脱脂棉线、塑料管和植株之间不错位,并且固定牢固,防止间隙太大造成溶液蒸腾损失;所述标记溶液为配制好的丰度为99%的13C-葡萄糖和丰度为99%的15N-尿素混合溶液,标记2次,中间间隔1周时间,每次加入1mL的标记溶液,吸收完毕后,再加入1mL~2mL的去离子水,以使脱脂棉线上残留的溶液全部被植物吸收;在全部标记过程完成后,将标记用的材料及装置从植物上取下,收集保存。
4.据权利要求3所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述进行标记的具体步骤如下:
①将植株周围的障碍物清除,防止操作过程中带来不便,以及造成污染;
②用体积分数为75%的酒精水溶液喷手、镊子以及会接触到的物品,进行消毒,防止感染植株;
③用镊子夹着棉球蘸取体积分数为75%的酒精水溶液,在植物待标记部位表面涂抹,进行消毒;
④用穿针器将脱脂棉线穿入针头,将针穿过塑料管,从塑料管中部出口拉出,要防止脱脂棉线滑出;
⑤将针穿过植株,从塑料管中部出口的另一端进入,从塑料管未穿线的一端出口拉出;
⑥用铜丝将塑料管的两部分并拢、并固定在标记植物上;
⑦用U型铁丝带动软管穿过预开口的气相色谱瓶盖,然后取下小瓶,取下U型铁丝,然后拧上小瓶,所述脱脂棉线末端要到达气相色谱瓶底端;
⑧用体积为1mL的注射器往瓶内加入标记溶液,吸收完成后再加入1mL~2mL去离子水,不标记的空白处理加入与标记溶液同样体积的去离子水;
⑨在标记溶液被完全吸收后,将标记用的材料及装置从植株上取下;
⑩标记完成后,在所标记的植株地表罩上孔径为1mm的丝网,定期收集落叶,防止落叶中的同位素影响土壤。
5.根据权利要求1所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤(3)中取样与测定的方法如下:
a.材料的准备;
b.进行取样;
c.进行测定。
6.根据权利要求5所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤a中准备的材料如下:自封袋、记号笔、镊子、铲子、筛子、磨样机、纸袋、塑料布、天平、纸袋。
7.根据权利要求5所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤b中取样步骤如下:
①将所标记的植物地上部分齐地面剪下,按植物的不同器官分类,装入纸袋中,分别在60℃下烘干72h,称重,使用球磨机磨样,待测;
②将所标记的植物所用土壤取出;
③将土壤捣碎,全部过孔径为2mm的筛子,得到主根系,用蒸馏水洗净,经所得主根系在60℃下烘干72h,称重,磨碎,待测;
④称量全部土壤的质量,将土壤充分混合均匀后取100g,烘干测定含水量;
⑤另取100g土壤,通过湿筛法用200目筛子筛洗,得到土壤中的剩余细根,将所得细根洗净并在60℃下烘干72h,称重;
⑥取适量土样,在60℃下烘干72h,球磨机磨碎,待测。
8.根据权利要求5所述的一种同位素茎秆双标记示踪方法,其特征在于,所述步骤c中测定方法如下:使用质谱仪分别测定所标记的植物样品与土壤样品中13C与15N的丰度,使用碳氮分析仪分别测定样品所标记的植物样品与土壤样品中的总碳和全氮含量。
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