[发明专利]人型支原体金标快速检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属临床医学检测技术领域，具体涉及胶体金免疫层析检测技术。

背景技术

人型支原体（Mycoplasma hominis，MH）是柔膜菌纲（Mollicutes）支原体属（Mycoplasmas）的一个种，主要寄生在人体泌尿生殖道，能引起男性前列腺炎、尿道炎，女性产后发热、反复流产、死产，新生儿初生重低、脑膜炎、肺炎等疾病。脂关联膜蛋白（Lipid-associated membrane proteins，LAMPs）是MH主要膜表面蛋白，具有高度抗原性并可能是宿主抗体的主要靶位。美国病原微生物所的研究表明，MH LAMPs结构相似，尽管表达量低，但免疫原性强。

检测人型支原体感染的方法有培养法和核酸检测法等。传统的检测方法是培养法，这种方法耗时长且容易出现漏诊，不能很好的适应临床快速检测的要求；而用于核酸检测的PCR方法敏感度好且准确性相对较高，但需要专业的仪器设备进行检验操作。免疫胶体金技术（immunocolloidal gold technique）是一种新型诊断技术，将其与免疫层析技术结合制作的检测试剂盒具有操作简单、无需特殊辅助仪器，结果判读快速等优点。本发明应用胶体金免疫层析技术，选取MH LAMPs中的Lmp1蛋白作为检测抗原，制备检测试剂盒，用于人体泌尿生殖道分泌物标本中的人型支原体检测。

发明内容

本发明旨在提供一种人型支原体金标快速检测试剂盒，用于人体泌尿生殖道分泌物标本中人型支原体抗原的检测，对人型支原体感染进行辅助诊断。本发明可解决人体人型支原体感染检测需专业仪器及耗时长等问题，提供一种检测特异性强、操作简单快速的试剂盒，可广泛用于各级医疗机构及体检普查的检测。

本发明包括卡盒和试纸条两部分。

所述卡盒包括盒盖和盒底两部分，材质为ABS树脂（丙烯腈-丁二烯-苯乙烯共聚物）；盒盖与盒底由柱和柱槽以插接方式连接，盒盖与盒底均为圆角长方形；卡盒正面可见加样孔和检视窗，加样孔为长圆形，检视窗为长方形；在检视窗位置可见反应膜、检测线T和质控线C，在加样孔位置可见试纸条样品垫；盒盖正面印有加样孔标注、结果判别说明及信息记录栏。

所述试纸条置于卡盒内部，安放在盒底上的试纸条槽中；试纸条由基板、双面胶、胶体金垫、样品垫、胶带、反应膜、吸样垫组成。基板材质为PVC塑料（聚氯乙烯），样品垫及胶体金垫材质为无纺布，反应膜为硝酸纤维素膜，吸样垫材质为吸油纸。所述试纸条利用工程表达的人型支原体Lmp1蛋白为抗原免疫小鼠制备抗Lmp1蛋白单克隆抗体，筛选出配对性良好、亲和力高的一对单克隆抗体分别作为捕获抗体和检测抗体；其中捕获抗体命名为抗体a，检测抗体命名为抗体b；胶体金标记的抗体a吸附于胶体金垫上，反应膜上检测线T位置包被抗体b，质量控制抗体为羊抗鼠IgG抗体。

本发明应用胶体金免疫层析技术，可检测人体泌尿生殖道分泌物标本中的人型支原体。检测时，若待测样品中含有达到阈值的人型支原体Lmp1抗原，足量的人型支原体Lmp1抗原与胶体金垫中的抗体a-胶体金复合物形成 人型支原体Lmp1-抗体a-胶体金复合物，在毛细作用下，人型支原体Lmp1-抗体a-胶体金复合物在反应膜上移动，在检测线T处与抗体b结合形成肉眼可见的红色检测线T，而未与人型支原体Lmp1抗原结合的抗体a-胶体金复合物则越过检测线T与包被在反应膜质控线C位置的羊抗鼠IgG抗体结合形成红色质控线C；若样本中无达阈值的人型支原体Lmp1抗原，则检测线T不可见，只见红色质控线C。

本发明调整胶体金标记技术，有效组合抗体蛋白，使所述试剂盒可在常温下（4℃~30℃）保存；同时，本发明具有免疫胶体金技术操作简单、结果判读快速、无需特殊设备的优点。

附图说明

图1是本发明的外观立体示意图。

图2是本发明的盒盖（4）背面示意图。

图3是本发明的盒底（7）正面示意图。

图4是本发明的试纸条正面示意图。

图5是本发明的试纸条侧面示意图。

图中各数字表示内容如下：1.加样孔 2.检视窗 3.信息记录栏 4.盒盖 5.加样孔标注 6.结果判别说明 7.盒底 8.柱 9.柱槽 10.试纸条槽 11.样品垫 12.胶带 13.反应膜 14.检测线T 15.质控线C 16.吸样垫 17.基板 18.双面胶 19.胶体金垫。

具体实施方式