[发明专利]一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及培养基领域，确切地说是一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法。

背景技术

目前多粘类芽孢杆菌多采用液体深层发酵技术，再经喷雾干燥进行生产，对设备要求高，生产工艺复杂，而固体发酵采用的原料一般是廉价的农副产品(如草粉、麸皮等)，采用的设备也较液体发酵简单，生产成本大大低于液体发酵。所以近年来各生产厂家都在积极探索芽孢杆菌的固体发酵技术，并有少数生产厂家开始试探性生产。通过试验发现多粘类芽孢杆菌对水稻纹枯病、油茶炭疽病等都有较好的效果，基于此进行了多粘类芽孢杆菌不同组分培养基固体发酵产菌量试验,以求简化生产工艺,提高产量,降低生产成本。

发明内容

本发明的目的在于提供一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法。

上述目的通过以下方案实现：

一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)按重量份称取下述原料混匀：稻壳10-15、玉米粉30-40、土豆10-20、茶渣饼5-10、水10-15、磷酸氢二钾0.1-0.2、硫酸锰0.18-0.22；

(2)将混匀后静置浸泡3.5-4.5小时后，装袋高压灭菌40-50分钟，待温度降到38-42℃后接入液体种子菌液，接种量9-11％，搅拌混匀后，36-38℃发酵培养70-74小时后，停止发酵，期间定时取样检查，即得

所述的一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法，其特征在于：采用芽孢革兰氏染色后显微镜下观察计算芽孢率。

本发明的有益效果为：本发明通过优化多粘类芽孢杆菌固体发酵培养基的配料组合，达到提高产量的效果，茶渣饼在发酵培养中能起到促进菌量增加和提高芽孢率的作用，

具体实施方式

实施例1、一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法，包括以下步骤：

(1)按重量(kg)比例称取下述原料混匀：稻壳15、玉米粉30、土豆20、茶渣饼7、水12、磷酸氢二钾0.2、硫酸锰0.2；

(2)将混匀后静置浸泡4小时后，装袋高压灭菌50分钟，待温度降到40℃后接入液体种子菌液，接种量10％，搅拌混匀后，37℃发酵培养74小时后，停止发酵，期间定时取样检查，即得

活菌计数:采用混匀平皿活菌计数法,按10倍稀释法制成不同浓度稀释液,从3个合适的稀释液中分别吸取0.1mL置于无菌培养皿中,每一稀释度做三个平皿。将事先融化并冷却至50℃左右的固体培养基向每个培养皿中倒入约12mL,摇匀,待凝固后,放入37℃培养箱中倒置培养24h,进行菌落记数。

采用芽孢革兰氏染色后显微镜下观察计算芽孢率。

活菌数263亿个·g^-1、芽孢率达92％。

实施例2、

一种培养高产量多粘类芽孢杆菌的方法，包括以下步骤：

(1)按重量(kg)比例称取下述原料混匀：稻壳15、玉米粉30、土豆20、茶渣饼7、水12、磷酸氢二钾0.2、硫酸锰0.2、柠檬酸0.1，晒干后的甘蔗渣0.1、氯化钠0.2、延胡索酸0.1、木薯粉0.2；

(2)将混匀后静置浸泡4小时后，装袋高压灭菌50分钟，待温度降到40℃后接入液体种子菌液，接种量10％，搅拌混匀后，37℃发酵培养74小时后，停止发酵，期间定时取样检查，即得

活菌计数:采用混匀平皿活菌计数法,按10倍稀释法制成不同浓度稀释液,从3个合适的稀释液中分别吸取0.1mL置于无菌培养皿中,每一稀释度做三个平皿。将事先融化并冷却至50℃左右的固体培养基向每个培养皿中倒入约12mL,摇匀,待凝固后,放入37℃培养箱中倒置培养24h,进行菌落记数。

采用芽孢革兰氏染色后显微镜下观察计算芽孢率。

活菌数273亿个·g^-1、芽孢率达92％。柠檬酸、木薯粉等添加剂可以促进菌种更加迅速稳定的生长，芽孢率高。

对比实施例：

一、材料与方法

1.材料

菌种为多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)由本试验室土壤中分离，并保存。

液体种子培养基:土豆20％，葡萄糖2％，NaCl0.5％，K2HPO41％。

固体发酵培养基用原料及试剂:麸皮、稻壳、玉米粉、土豆、茶渣饼(油茶副产品)、磷酸氢二钾、硫酸锰等,具体配方见表1。

主要设备:蒸气消毒器、超净工作台、控温摇床、控温生化培养箱、天平、显微镜。

2.方法